初代海馬ニューロンのリン酸カルシウムトランスフェクション

一次ニューロンは、それらが有糸分裂後で、微小環境の変化に非常に敏感であるようにトランスフェクトする最も困難な細胞タイプの一つである。これらの細胞¹における外来遺伝子および短期ヘアピンRNA（shRNAの）の発現のための方法の4一般的に使用されるタイプがあります。それぞれ独自の長所と短所があります。細胞はトランスフェクションのためのキュベットに移しなければならないので、例えば、エレクトロポレーションは、通常、新たに単離されたニューロン²上で実行される。ウイルス感染は通常、非常に高い効率^3を達成するが、事業者のためのより多くの労働集約的で危険であることができます。多くの脂質媒介トランスフェクション試薬は、ニューロンおよび細胞毒性の異なるレベルにおける成功の度合いは様々で、市販されている。

リン酸カルシウムトランスフェクションは、神経細胞に外来遺伝子を導入するための、便利で経済的な方法を表す。方法は、第一の哺乳類セルへのアデノウイルスDNAを導入するために使用されたグラハムとファンデEB（1973）によるLS ^4。トランスフェクションは、リン酸緩衝液中の組換えDNAと塩化カルシウムを混合することにより行った。これは、徐々に細胞の単層上に滴下したとき、細胞表面に付着し、DNA /リン酸カルシウム沈殿物の形成は、エンドサイトーシスによって取り込まれることができ、最終的に核に^5を入力してください。このプロセスは、標的細胞における導入外来遺伝子の発現につながる。 ^{0.5〜5％、6〜8}の間のリン酸カルシウムトランスフェクション範囲の典型的な効率。しかしながら、慎重な最適化お​​よび実験プロトコルの一貫性のある実行と、それは約50％のトランスフェクション効率を達成することができる。ここでは、サンドイッチフォーマット⁹にアストログリア細胞と共培養された初代海馬ニューロンのリン酸カルシウムトランスフェクション、私たちの詳細なプロトコルを記述します。