Laser Capture microdissection av nerveceller fra Differensiert Menneskelig Neuroprogenitor celler i kultur

Livs lang neurogenesis er kjent å forekomme i subventricular sone av den laterale ventrikler og i subgranular lag av dentate gyrus av den voksne hjernen hos pattedyr ^en. Neuroprogenitor celler (NPC) som stammer fra disse regionene er multipotente celler som kan differensieres til nevroner, astrocytter og oligodendrocytes ^to. NPC har vakt interesse på grunn av deres potensial til å bli transplantert i pasienter med forskjellige neurodegenerative forstyrrelser inkludert Parkinsons sykdom, amyotrofisk lateral sklerose, slag og Alzheimers sykdom (AD) ^3. Studier med NPC har generelt fokusert på denne transplantasjon vinkel, men potensialet for NPC-avledet nerveceller som en cellekulturmodell for å bestemme mekanismen for nevrodegenerasjon er ikke blitt fullt utnyttet. Tidligere studier har generelt brukt post-mitotiske neuroner isolert fra gnager hjernevev som må være isolert for hvert forsøk som de ikke erselvfornyende. Selv om menneskelig neuroblastom cellelinjer inkludert SH-SY5Y og SK-N-MC celler kan utvides, de har ikke de samme egenskapene av primære nevroner. Menneskelige NPC, på den annen side, gir både fordeler fordi de kan utvides for flere passeringer, og kan differensieres for å generere en cellepopulasjon med egenskapene til primære neuroner ^4,5. I den aktuelle studien, beskriver vi en ny differensiering protokollen for å oppnå en konsistent nevron-rik befolkningen fra kommersielt tilgjengelige NPCer isolert fra menneskelig fosterets hjerne. Fordi disse kulturene inneholder en liten prosent av gliaceller, trenger vi flere metoder for å isolere en ren populasjon av nevroner for molekylær karakterisering. Laser-fangst microdissection (LCM) er en ny metode der en homogen populasjon av celler fra en vev delen kan være selektivt fanget genekspresjonsanalyser ⁶ for. Hjernen er et heterogent vev bestående av nerveceller, gliaceller og andre celle types. LCM er blitt brukt til å bestemme neuron-spesifikk genekspresjon analyser ^7-10. Vi har tidligere utført LCM av hippocampus nevroner fra AD (Tg2576) mus hjerne seksjoner for å vise redusert uttrykk av syklisk AMP respons element bindende protein (CREB) og BDNF spesielt i hippocampus nevroner ^11. I den foreliggende studien, beskriver vi prosedyrer for utvidelse av menneskelige NPCer, neuronal differensiering, immunofluorescent farging for nevronale markører og LCM for isolering av nerveceller dyrket på PEN membran sklier.