清醒的行为小鼠慢性神经录音的微型硬盘阵列建设
Summary
在体内的电生理记录从小鼠的脑信号的设计和组装的微型硬盘进行说明。通过将微电极束驾驶坚固的运营商，这些技术允许长期和稳定的神经录音。轻巧的设计可以不受限制以下驱动器植入动物的行为表现。
Abstract
国家最先进的电生理记录自由活动动物的大脑，使研究人员能够同时检测局部场电位（的LFP）从单个细胞的神经元和动作电位的人群，从事动物实验相关的任务。长期植入微型硬盘让大脑录音持续了几个星期期间。小型化的驱动器和轻量级组件，让这些长期的记录发生在小型哺乳动物，如小鼠。通过使用四极管，它包括四个电极，其中每根导线有一个直径为12.5微米的紧密编织束，它是可以分离生理活性的神经元在浅表的大脑区域，如大脑皮层，背侧海马和下托，以及更深的区域，如纹状体和杏仁核。此外，这种技术确保稳定，高保真神经的录音作为动物的挑战与多款TY行为的任务。这手稿描述几种技术进行了优化，从小鼠大脑记录。首先，我们展示了如何制造四极管，将它们加载到驾驶管，板金他们的技巧，以降低其阻抗MΩkΩ范围。其次，我们将展示如何构建一个定制的微型硬盘（Microdrive）组件，携带和移动的四极管垂直，使用廉价的材料。第三，我们显示的步骤组装市售的微型硬盘（Neuralynx VERSADRIVE），旨在进行独立移动四极管。最后，我们提出了局部场电位和单机信号在小鼠背下脚获得的典型结果。这些技术可以很容易地修改以适应不同类型的电极阵列和对小鼠脑组织的记录方案。
Introduction
利用微电极技术记录外体内的神经信号在神经科学1，2有一个长期和价值的传统。许多自由活动动物的脑区能够记录电活动，但是，最近的技术，正在成为越来越普遍变得更加复杂和用户友好的软件包的神经信号的采集，分析和歧视， 4。在软件方面的技术进步也伴随着可植入设备的重量和体积减少，已充分缩减小型哺乳动物，如小鼠的记录。通过使用轻量级的组件（主要是塑料），研究人员能够构建微型硬盘，使电极或四极管，以针对各种各样的大脑区域5-7的独立定位。即使是脑深部结构，如杏仁核和纹状体5，可以经常有针对性的选择适当长的传动螺杆。这些记录技术使研究人员能够获得高保真神经信号，并注册单个神经元的电活动记录细胞内8，9。使用这些类型的微型硬盘，我们已经成功地记录单台长达两个月的小鼠植入后10。此外，设备的轻量的特性（约1.5〜2.0克）导致的行为表现，是许多行为的任务中的非注入小鼠比较。特别是，我们已经证明，植入小鼠表现出正常的表现在新物体识别任务10和对象的地方任务（未公布数据）。
使用微型硬盘连接到多个四极管，使研究人员能够监测和分析在网络层面的神经活动同时也记录从大脑内的多个单个单元。记录这些四极管单位的身份证明文件的目的有几大优势，并让多个单单元11高精度采集和歧视。我们描述了如何制造和镏金四极束，随后将它们加载到驾驶电极载体。一种类型的驱动器托架，我们描述的是市售的，另一种是简单，但很容易地扩展，驱动设计，可容纳多个运营商和四极管安排没有重大投资资源。
Protocol
Representative Results
Discussion
我们已经描述了一组技术构建细胞外单位记录和字段的潜在活性在小鼠的轻量，小型的微型硬盘。构建自定义的微型硬盘，老式的丙烯酸玻璃（甲基丙烯酸甲酯）的基地，核心系统可以很容易地适应多个驱动器和针对广泛的神经区域。我们已经成功地修改了系统记录从多个脑目标和较大的阵列小鼠录音。随着进一步的修改，电动驱动元件可以结合，以便能够远程，可能更精确，电极放置7。</su…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢丹尼尔·卡尔皮他的帮助下，该项目的早期贡献。我们也感谢她协助艺术品和图像卢西亚·诺沃亚。这项工作是由NIH / NIAID项目资助5P01AI073693-03的支持。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.0005″ (12.5 μM) diameter Platinum-Iridium wire | California Fine Wire | CFW#100-167 | HML VG insulated www.calfinewire.com |
| 0.002″ (50 μM) diameter Stableohm 675 wire | California Fine Wire | CFW# 100-188 | HML insulated Ni-Cr |
| polyamide tubing | Polymicro Technologies | 1068150020 | 99 micron I.D., 166 micron O.D. www.polymicro.com |
| brass guides | World Plastics Inc | 3.3 x 6.6 mm | |
| Delrin blocks | World Plastics Inc | 3.13 x 2.5 mm | |
| Fillister head brass screws | J.I. Morris Co. | 00-90 x 1/2 | drive screw www.jimorrisco.com |
| hex brass nuts | J.I. Morris Co. | 00-90 | |
| Fillister head brass screws | J.I. Morris Co. | 000-120 x 3/32 | EIB mount and ground screw |
| plexiglass acrylic | Canal Street Plastics | 5 mm thick, clear, www.cpcnyc.com | |
| cyanoacrylate | Krazy Glue | 2 g tube | |
| electronic interface board | Neuralynx | EIB-18 | www.neuralynx.com |
| non-cyanide gold solution | SIFCO | SIFCO 5355 | www.sifcoasc.com |
| VersaDrive 4 | Neuralynx | four tetrode model | |
| tetrode assembly station | Neuralynx | ||
| motorized tetrode spinner | Neuralynx | tetrode spinner 2.0 | |
| VersaDrive jig | Neuralynx | ||
| soldering iron | Radio Shack | 64-2802B | www.radioshack.com |
| nanoZ | Neuralynx | ||
| small bit drill/driver | Ram Products | Rampower 35 | with footpedal controller, www.ramprodinc.com |
| drill bits | Small Parts, Inc. | 3/32″ bits, www.smallpartsinc.com | |
| dissecting microscope | Olympus | SZ-60 | www.olympusamerica.com |
| heat gun | Alphawire | Fit gun 3 | use setting “1” only, www.alphawire.com |
| 26 AWG copper wire | Arcor Electronics | F26 | for ground wires, www.arcorelectronics.com |
| soldering flux | Eagle | 2 oz, #205 | |
| 0.02″ diameter solder | Kester | 24-6337-0010 | www.kester.com |
| benchtop vise | Vacu-Vise | Model 300 | |
| fiber optic light | Nikon | MKII | dual light arms, www.nikon.com |
| 5-min epoxy | Allied Electronics | 25 ml, www.alliedelec.com | |
| fine tweezers | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-4907, RS-5010 | INOX material, www.roboz.com |
| micro dissecting scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5880 |
Table 1. Materials and reagents used for constructing tetrodes and microdrives.
Referenzen
- Recce, M. L., O’Keefe, J. The tetrode: a new technique for multi-unit extracellular recording. Soc. Neurosci. Abstr. 15, 1250 (1989).
- O’Keefe, J., Recce, M. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3, 317-330 (1993).
- Chen, G., Wang, L. P., Tsien, J. Z. Neural population-level memory traces in the mouse hippocampus. PLoS ONE. 4 (12), e8256 (2009).
- Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents — EEG, ECoG, LFP, and spikes. Nat. Rev. Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).
- Tort, A. B., Kramer, M. A., et al. Dynamic cross-frequency coupling of local field potential oscillations in rat striatum and hippocampus during performance of a T-maze task. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 105 (51), 20517-20522 (2008).
- Seidenbecher, T., Laxmi, R., et al. Amygdalar and hippocampal theta rhythm synchronization during fear memory retrieval. Science. 301 (5634), 846-850 (2003).
- Yamamoto, J., Wilson, M. A. Large-scale chronically implantable precision motorized microdrive array for freely behaving animals. J. Neurophysiol. 100 (4), 2430-2440 (2008).
- Harris, K. D., Henze, D. A., et al. Accuracy of tetrode spike separation as determined by simultaneous intracellular and extracellular measurements. J. Neurophysiol. 84 (1), 401-414 (2000).
- Henze, D. A., Borhegyi, Z., et al. Intracellular features predicted by extracellular recordings in the hippocampus in vivo. J. Neurophysiol. 84 (1), 390-400 (2000).
- Chang, E. H., Huerta, P. T. Neurophysiological correlates of object recognition in the dorsal subiculum. Front. Behav. Neurosci. 6, 46 (2012).
- Gray, C. M., Maldonado, P. E., et al. Tetrodes markedly improve the reliability and yield of multiple single-unit isolation from multi-unit recordings in cat striate cortex. J. Neurosci. Methods. 63 (1-2), 43-54 (1995).
- O’Keefe, J., Dostrovsky, J. The hippocampus as a spatial map. Preliminary evidence from unit activity in the freely-moving rat. Brain Res. 34 (1), 171-175 (1971).
- Wilson, M. A., McNaughton, B. L. Dynamics of the hippocampal ensemble code for space. Science. 261 (5124), 1055-1058 (1993).
- Buzsáki, G. . Rhythms of the Brain. , (2006).
- McHugh, T. J., Blum, K. I., et al. Impaired hippocampal representation of space in CA1-specific NMDAR1 knockout mice. Cell. 87 (7), 1339-1349 (1996).
- Resnik, E., McFarland, J. M., et al. The effects of GluA1 deletion on the hippocampal population code for position. J. Neurosci. 32 (26), 8952-8968 (2012).
- Cacucci, F., Yi, M., et al. Place cell firing correlates with memory deficits and amyloid plaque burden in Tg2576 Alzheimer mouse model. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (22), 7863-7868 (2008).
- Sigurdsson, T., Stark, K. L., et al. Impaired hippocampal-prefrontal synchrony in a genetic mouse model of schizophrenia. Nature. 464 (7289), 763-767 (2010).
- Engel, A. K., Moll, C. K., et al. Invasive recordings from the human brain: clinical insights and beyond. Nat. Rev. Neurosci. 6 (1), 35-47 (2005).
- Cash, S. S., Halgren, E., et al. The human K-complex represents an isolated cortical down-state. Science. 324 (5930), 1084-1087 (2009).
