L'évaluation de la fonction sensori-motrice chez des souris modèles de la maladie de Parkinson

Idéalement souris doivent être testés au cours de leur cycle actif (noir). Les souris dans notre laboratoire sont maintenus sur un cycle lumière / obscurité inverse qui nous permet de tester facilement les souris pendant leur période active (et la nôtre). Le test n'est pas lancé avant au moins une heure dans le cycle sombre. Cependant, il n'est pas toujours possible pour un enquêteur de maintenir une pièce séparée de la souris avec un cycle de lumière inversé. Dans ce cas, tous les trois tests peuvent être effectués pendant le cycle de lumière, mais gardez à l'esprit que le temps de traverser le faisceau, le nombre d'étapes et de se cabre dans le cylindre, et le contact et le temps d'élimination peut être plus long lorsqu'il est testé pendant cette période. Tous les trois essais décrits ci-dessous peuvent être effectuées par un expérimentateur, mais pour ceux qui ne sont pas aussi expérimenté la manipulation et de travailler avec la souris ou qui ont peu ou pas d'expérience comportement mesurer chez la souris puis un expérimentateur supplémentaires peuvent être nécessaires. Dans ce cas, le second expérimentateur peut vous aider àle test de faisceau difficile en plaçant la souris sur la poutre tandis que l'autre expérimentateur enregistre le procès ou lors du test de suppression adhésif le second expérimentateur peut exécuter la minuterie alors que les autres places l'autocollant sur le museau et les lieux de la souris dans la cage. 1. Contestation faisceau Traversal procédure Inversez 3 cages propres de la souris sur une table ou dans une station cage évolution souris. Alignez les cages de manière uniforme afin qu'ils puissent supporter la longueur de la poutre (1 mètre). Assemblez les quatre sections de la poutre de la plus large à la plus étroite section et placer sur le dessus des cages de souris inversés. Placez le homecage des souris que vous envisagez de tester sur le côté et à l'extrémité de la poutre de sorte que l'extrémité la plus étroite du faisceau mène droit dans le homecage. Ramassez la première souris par la base de sa queue et de soutenir ses membres postérieurs avec la paume de votre main. Placez la souris à l'extrémité large de la poutre et de laisser aller de sa queue et retirez votre hand. Laissez la souris renifler et se déplacer afin d'être mieux orienté vers l'appareil, si la souris tourne autour de rediriger doucement dans la direction souhaitée. Soulevez le homecage (même si elle n'a compagnons de cage à l'intérieur) maintenant dans la même position sur le côté et la rapprocher de la souris de l'essai. Comme la souris d'essai commence à essayer d'entrer dans le homecage déplacer en arrière pour que la souris ne passe pas mais fait un pas en avant. Continuez à faire cela tout le long de la poutre. A la fin de la souris permet d'entrer dans le homecage. Faites la même procédure pour chaque souris dans la cage. Il s'agit du premier procès "assistée". Le faisceau doit être soigneusement nettoyé entre les cages avec un désinfectant fourni par les soins des animaux ou le personnel vétérinaire. Dans une cage, il est important de nettoyer l'urine ou excréments au large de la poutre avant la prochaine souris de fonctionner parce que cela va distraire la prochaine souris. Une fois que toutes les souris dans la cage ont traversé une épreuve assisté ensuiteramasser la première souris à nouveau et le placer à l'extrémité large de la poutre. Si nécessaire, avec votre main doucement orienter la souris dans la direction souhaitée et appuyez légèrement sur son dos pour l'inciter à se déplacer le long de la longueur de la poutre dans son homecage. Si la souris s'arrête pour renifler ou à pied de la poutre corriger la souris avec la main ou le ramasser et le placer sur la même section où il s'éloigna. Avoir la main à proximité de guider la souris à l'extrémité de la poutre. Vous voulez essayer de minimiser la souris s'arrêter et d'explorer tout sur la poutre. Le plus cela se fait au cours de la formation du moins la souris a tendance à le faire pendant le test. Le procès se termine lorsque la souris place une de ses pattes avant dans le homecage. La souris suivante peut alors recevoir sa 2 ème essai. Souris reçoivent un total de 5 essais sur la première journée de formation, alternant entre des souris de sorte que chaque souris a un intervalle intertrial de ~ 30 sec ou plus. En règle générale par les derniers essais quelques souris va parcourir la longueur de lafaisceau, de leur propre chef, sans nécessité de corriger. 24 h plus tard 2 jours de formation peut commencer. Le jour 2, les souris reçoivent 5 autres essais sur le même faisceau set-up que dans 1 jour. Les souris ne devraient pas besoin d'aide, mais peut-être besoin d'être corrigé ou touché à l'arrière pour éviter l'arrêt ou explorer. 24 heures plus tard, le jour du test réel peut commencer. Pour le jour de l'essai, le faisceau est mis en place de manière similaire aux deux derniers jours de formation. Cependant, maintenant une grille de maille qui correspond à chaque largeur de faisceau est placé sur le dessus de chaque section de poutre. Une caméra vidéo est utilisée pour enregistrer tous les essais faisceau traversée et peut être réalisée par un ou plusieurs expérimentateurs. Nommez une carte avec les informations de l'expérience indispensable (date, souris #, essai #, etc.) Placez cette carte devant la caméra et record pour 2-3 sec pour qu'il soit clair qui souris est testé et ce procès, il est en marche. La souris est placée sur le dessus de la surface de la grille sur la partie la plus large de la poutre et a enregistré unes il se déplace le long de la poutre. L'enregistrement doit être suffisamment proche de sorte que toute la longueur du corps de la souris est visible sur l'appareil. Si elle est trop loin puis glisse sont difficiles à voir et si elle est trop près alors les mouvements des membres peuvent être oubliés. La caméra doit être positionnée de telle sorte que la grille est au milieu de l'observateur. Le jour de l'essai, toutes les souris reçoivent 5 essais sur la poutre grille-surface. 2. Analyse du faisceau vidéo Les vidéos peuvent être visualisés directement depuis l'appareil ou connecté à un téléviseur ou à un ordinateur pour une vue grand écran. Les bandes vidéo doivent être marqués par un expérimentateur aveugle à génotype et les conditions de traitement dans l'expérience. Erreurs pour chaque essai sont notés comme la vidéo est lue au ralenti. Les glissades ou des erreurs sont comptabilisés lorsque la souris est confrontée et aller de l'avant. Un glissement à travers ou à l'extérieur de la grille est considéré comme une erreur lorsque le membre glisse au-delà de 0,5 cm sous la surface de la grille (mi-course). Toutes les fichesfaite après une souris s'arrête ou oriente sa tête sur le côté ne sont pas considérées comme des erreurs. Si la souris ne se déplace pas en avant et un membre ou des membres glisse à plusieurs reprises à travers la grille, il n'est PAS considérée comme une erreur. Sur la partie étroite de la poutre de la base des membres postérieurs peut être au-dessus de la grille et les orteils suspendus sur le côté, ce n'est pas considéré comme une erreur. Des mesures sont également comptabilisés au ralenti. La patte arrière face à la caméra permet de suivre le nombre d'étapes. Le comptage commence lorsque la souris fait son premier pas en avant et se termine lorsque la souris met sa patte avant dans le homecage. Il est temps de traverser est marqué à l'aide d'un chronomètre et se fait en temps réel. Le chronomètre est déclenché lorsque la souris se met à aller de l'avant et se termine lorsque la première patte est placé dans le homecage. 3. L'activité spontanée dans la procédure Cylindre Inversez 3 cages propres de la souris sur une table ou dans une station cage évolution souris. Disposer deux cages à côté de ehaque autre ~ 18 cm, de sorte que le front des cages sont confrontés l'expérimentateur. La cage reste est placé derrière les deux autres cages et va servir de support du miroir. Placer le morceau de verre sur le dessus des deux cages et le positionner de sorte que le verre est soutenu par le bord extérieur des deux premières cages. Placer le cylindre au-dessus du verre et le miroir à un angle au-dessous de la vitre, en s'appuyant sur ​​le 3 ème cage en arrière. L'angle peut varier de 30 ° – 45 °, mais plus important encore, la vue depuis le miroir doit inclure le plein diamètre du cylindre. Réglez la caméra vidéo en face du miroir et de régler à la fois le miroir et caméra vidéo jusqu'à ce que vous pouvez voir la totalité du diamètre du fond du cylindre. Réglez la minuterie pendant 3 min et étiqueter une carte avec les détails d'expériences importantes (date, souris #, etc.) Videorecord l'étiquette de 2-3 sec. Placez la souris dans le dossier du cylindre et la presse et la minuterie. Record la souris pendant trois minutes. Il est important que la zone d'essai est calme comme bruits et les conversations peuvent distraire la souris et potentiellement provoquer un comportement de congélation. Au cours de la 3 min en utilisant un compteur de main pour compter le nombre des arrières de la souris fait alors dans le cylindre. A l'arrière se définit comme un mouvement vertical avec deux membres antérieurs sur le sol de sorte que la souris est debout seul sur ses membres postérieurs. A la fin du 3 min enlever la souris et le replacer dans son homecage. Nettoyez le cylindre et le verre avec un désinfectant fourni par les soins des animaux ou le personnel vétérinaire. Laisser la solution de nettoyage à sec avant de passer la prochaine souris dans le cylindre. 4. Analyse de l'activité spontanée Les vidéos peuvent être visualisés directement depuis l'appareil ou connecté à un téléviseur ou à un ordinateur pour une vue grand écran. Les bandes vidéo doivent être marqués par un expérimentateur aveugle à génotype et les conditions de traitement dans l'expérience. Étapes membres antérieurs sont comptés comme la vidéo est lue au ralenti. Une étape patte avant est comptée lorsqu'un animal se déplace à la fois membres antérieurs de façon séquentielle à travers le plancher du cylindre en un mouvement consécutif. Un mouvement des membres antérieurs n'est pas comptabilisé si le délai entre le mouvement d'une patte avant et l'autre patte avant est plus long que 5 sec. Étapes membres postérieurs sont comptabilisés de la même manière que les étapes membres antérieurs. Le temps passé toilettage est mesurée à l'aide d'un chronomètre et la lecture de la vidéo en temps réel. Épisodes toilettage sur le museau, vibrisses, et le corps sont mesurées. 5. Retrait adhésif Placez la souris dans sa homecage dans la salle d'examen ou dans une station cage évolution souris. Retirez le bac d'alimentation de la cage et remplacer le couvercle de la cage. Laisser les souris / souris pour s'habituer à la salle d'examen et la cage sans le chargeur pendant 1 heure. Pour tester utiliser une cage propre à placer compagnons de cage de sorte que la souris de test est le seul dans le homecage.Retirer ~ 3/4 de la literie et le placer dans la cage propre avec les compagnons de cage. Dans la nuque homecage la souris de test afin de retenir et en utilisant une paire de pinces petite place une étiquette adhésive sur le museau de la souris. Appuyez doucement sur l'étiquette sur le museau avec la pince et relâchez la souris. Placer le couvercle sur la cage et déclencher un chronomètre. Lorsque la souris fait une tentative de retirer l'étiquette avec ses pattes avant d'enregistrer l'heure. Si la souris est en contact, mais ne supprime pas l'étiquette puis garder la minuterie va jusqu'à ce qu'il ne supprime et enregistrer ce moment-là ainsi (contact et l'heure de retrait). Si la souris ne pas contacter ou enlever l'autocollant dans les 60 secondes, puis le procès est terminé et l'autocollant est retiré manuellement par l'expérimentateur. Placez la souris d'essai dans la cage propre et enlever la prochaine souris et le placer dans le homecage et commencer à tester. Toutes les souris reçoivent 3 essais. Il est important d'alterner entre les souris plutôt que de faire les trois essais dansune souris à la fois. Essais où l'étiquette se décolle ou n'est pas sécurisé sur le museau ne sont pas comptés.