Ensaio Escolha Vertical labirinto em T para a resposta de Artrópodes para odores

Montagem de um design personalizado, dois porta-dividido T-olfactómetro descrito anteriormente no Mann et al. 10 é mostrada na Figura 1. O olfactómetro é constituído por um tubo de vidro de 30 cm, que é bifurcado em duas portas separadas com uma tira de Teflon formar um labirinto em T. Cada metade é análogo a um braço de um olfactómetro estilo 2-escolha permitindo o sujeito de teste para escolher entre dois campos de odor potencial. Ensaios de montagem e subsequente deve ocorrer dentro de uma sala com temperatura controlada ou câmara ambiental. Monte vidro olfatômetro T-labirinto vertical, como mostrado na Figura 1 e posicioná-lo sob uma lâmpada fluorescente luz 900 lux. Para a difusão de luz ideal, o conjunto deverá ser montado dentro de um 1,0 x 0,6 x 0,6 m recipiente opaco para maximizar a difusão da luz uniforme. Ligue os braços olfatômetro de fontes de odor que serão alojados em fase sólida micro-extracção / exploração de odor fonte Chamber (SPMEC) (ARS, Inc., Gainesville, FL) através de Teflon; conectores de tubo de vidro. Cada SPMEC é constituído por um tubo de vidro (17,5 cm de comprimento x 3,5 cm de largura) suportado com uma entrada e uma válvula de saída para as correntes de ar de entrada e de saída (Figura 1). Ligar o sistema de fornecimento de ar a uma fonte externa de ar humidificado e carbono-purificado que está sob pressão constante (o sistema de fornecimento de ar tem tanto um filtro de carbono para a purificação do ar interno e um borbulhador de ar para a humidificação se fontes externas estão disponíveis). Dissolver amostras químicas desejadas dentro diluente apropriado (solvente) e uma pipeta sobre um substrato de libertação lenta, tal como um pavio de algodão (Petty John Packaging, Inc., Concord, NC). O tratamento de controlo deve ser composto de um pavio de algodão impregnado com apenas solvente. Para evitar a contaminação significativa da vidraria, envolver os pavios de algodão tratados e controle no tecido laboratório (Kimwipes, Kimberly-Clark, Roswell, GA) e em lugar dos dois braços SPMEC (ARS, Inc., Gainesville, FL). No caso de amostras de plantas vivas, uma câmara de recolha de guilhotina volátil pode ser anexado ao olfactómetro contendo tratamentos em lugar do SPMEC (Figura 1). Entregar purificado e ar humidificado por meio do SPMEC (ou câmara de guilhotina voláteis) por meio de duas bombas ligadas a um sistema de fornecimento de ar (Figura 1). Manter a taxa de fluxo de ar de 0,1 L / min através de ambos os braços do olfactómetro. Empregando olfactómetro para testar a resposta de repelentes de artrópodes putativos. Na presente descrição, um insecto hemípteros, psyllid citrino asiático, Diaphorina citri, foi utilizado como um teste de artrópodos. Resposta foi testada para produtos voláteis de citrinos, isoladamente ou em combinação com um (dissulfureto de dimetilo) e repelente de ar limpo como fontes de odor. Realizar todos os experimentos a uma temperatura padronizada e umidade relativa. Antes de todos os testes, expor tassuntos est para limpar ar versus ar limpo ou ar solvente contra limpa no olfatômetro labirinto em T para verificar a ausência de viés posicional ou um efeito de solvente sobre o comportamento do sujeito teste. Atribuir uma fonte de odor aleatoriamente a um dos braços do olfatômetro no início de cada bioensaio. Inverter esta posição depois de cada 10 indivíduos de teste analisadas, no mínimo, para eliminar o potencial de polarização de posicionamento. Testar a resposta de um mínimo de 30 (e até 120) cobaias por combinação. Permitir teste 100-300 sec sujeitos a exibir uma resposta comportamental com base na resposta previamente estabelecido (latência) intervalo. Sujeito registo se entra no braço do tratamento, o braço de controlo ou permanece na porta de libertação ou abaixo da divisão labirinto em T. Marcar uma escolha braço de tratamento ou controle quando um assunto de teste atravessa a divisão no labirinto em T e se move para qualquer braço olfatômetro. Marcar uma escolha braço de liberação quando um teste sem prejuízo permanece na porta de libertação ou abaixo da divisão labirinto em T. Limpar o olfactómetro e tubos de ligação cuidadosamente com uma solução de sabão a 2% e cozer os componentes de vidro a 200 ° F entre a utilização de tratamentos de odores diferentes. Para os ensaios em que putativas tratamentos repelentes são apresentados no olfactómetro labirinto em T com ou sem um tratamento químico em relação ao ar puro, comparar o número de indivíduos de teste restantes no ponto de libertação e não entrando no olfactómetro entre os tratamentos por uma análise de variância ( ANOVA) seguida pelo teste HSD de Tukey (α <0,05). Nos casos em que os indivíduos do teste deixar o braço de liberação, compare o número de escolher o braço de controle versus o braço de tratamento com qui-quadrado (χ 2) análise de α <0,05.