차단 혈액 시스템을 사용하여 준비 및 더블 복용 버피 코트의 혈소판 제품의 병원체 불 활성화

1. 전체 혈액 수집 450 ML의 상단에있는 자원 봉사 기증자로부터 온 혈액을 수집 / 하단의 컬렉션은 지역 혈액 수집 가이드 라인에 따라 설정합니다. 전체 피를 원심 분리 및 분리하기 전에 냉각 판에 2 시간의 최소 저장됩니다. 2. 버피 코트 준비 적혈구, 버피 코트, 그리고 플라즈마 : 3 층에 혈액을 분리하는 하드 스핀을 사용하여 전체 혈액을 원심 분리기. 사용 원심 분리기 매개 변수 ± 2 ° C. 22 11 분에 4,880 RCF했다 수집 용기에 버피 코트를 떠나지, 상단 위성 가방과 바닥 위성 가방에 적혈구 (RBC)에 플라즈마를 표현하기 위해 자동화 된 혈액 분리기를 사용하십시오. 버피 코트는 각각 약 48 ML 37 %입니다에 대한 볼륨 및 혈소판 범위를 의미 타겟팅 할 수 있습니다. 버피 – 코트 22 ± 2 ° C.에서 혈소판 교반기에 하루 아침에 저장됩니다 <p class = "jove_title"> 3. 버피 코트 풀링 멸균 연결 7 버피 코트 및 병렬 라인 열차 구성에서 SSP + 혈소판 첨가제 솔루션 (PAS) 300 ML은 기차 길이를 감소, PAS는 열차의 맨 위에 있어야합니다. PAS 및 제 버피 코트 사이에 선을 고정. 버피 코트 단위 사이의 무균 연결을 열고 버피 코트가 마지막 용기에 배출 할 수 있습니다. 용접 및 PAS 및 제 버피 코트 사이의 클램프를 엽니 다. 첨가제 솔루션의 삼분의이 순차적으로 버피 코트 컨테이너의 각을 씻어 할 수 있습니다. 두 번 이상 남아있는 PAS의 절반을 사용하여 각 시간을 반복합니다. 평균 버피 코트 풀 볼륨 약 600 ML해야합니다. 각 버피 코트의 대상 볼륨과 혈소판이 충족되면 플라즈마 비율은 32 수 – 47% 나중에 그 과정에서 가로 챌 병원체 불 활성화 처리를 위해 필요에 따라. 빈 SSP +와 버피을 삭제 하시겠습니까코트 용기. 최적의 혈소판 복구를 들어, 원심 분리하기 전에 1 시간 동안 교반에 수영장을 유지. 멸균은 버피 코트 수영장에 통합 leukoreduction 필터와 혈소판 스토리지 컨테이너를 연결합니다. 정지 혈소판 (9 분 20 초에 462 RCF)에서 적혈구를 분리 할 수​​있는 버피 코트 수영장의 "부드러운 스핀"을 수행합니다. 혈소판 저장 용기에 leukoreduction 필터를 통해 자동으로 혈액 분리기를 사용하여 혈소판 현탁액을 표현한다. 420 ML 볼륨, 2.5-7.0 X 10 11 혈소판 복용하고, ≤ 4 X 10 6 / ML 붉은 세포 – 이전에 설명 된 처리 요구 사항은 혈소판 정지가 차단 300 ML 처리 사양을 충족하는지 확인합니다. 4. 치료를 차단 수집 후 1 일의 끝 (하루 0 수거의 날입니다) 전에 차단 치료를 수행합니다. 차단 처리 세트 포장을 푸는투명한 플라스틱 주머니에서 듀얼 저장 용기가있는. 멸균은 도청 처리 세트에 amotosalen 컨테이너의 튜브에 혈소판 정지 컨테이너를 연결합니다. 지역 요구 사항에 따라 적절한 혈액 제품 식별을 차단 처리 설정 저장 용기 라벨을 지정합니다. 혈소판을 잡아와 조명 컨테이너에 흐름에 amotosalen 솔루션을 수 있도록 먼저 amotosalen 컨테이너에 하단의 캐뉼라을 깰. 혈소판은 조명 컨테이너에 amotosalen 컨테이너를 통해 흐를 수 있도록 amotosalen 컨테이너의 상단 캐뉼라를 해봐. 부드럽게 혈소판과 amotosalen 혼합물을 혼합 amotosalen 컨테이너에 조명 컨테이너에서 공기를 표현한다. 튜브의 4cm에 대해 작성, 튜브에 혈소판 혼합물의 작은 금액을 표현한다. 이 튜브와 조명 컨테이너 모두에서 혈소판이 병원체 inactivati​​을 받다 보장치료. 조명 컨테이너와 amotosalen 컨테이너 사이의 튜브를 밀봉합니다. 조명 컨테이너에서 연장 튜브의 약 4cm보다 더를 남겨 없습니다. 제거하고 폐기 빈 혈소판과 amotosalen 용기를하고 샘플링 파우치에 클램프를 닫습니다. 왼쪽에있는 큰 칸에있는 조명 컨테이너와 오른쪽에있는 작은 구획의 주최자와 조명기로 처리 세트를 놓습니다. 조명기에 기부 ID, 제품 코드, 및 가공 세트 로트 번호를 입력 휴대용 바코드 장치를 사용합니다. 금속 커버를 닫고 조명기 그래픽 인터페이스에 메시지가 표시되면, 서랍을 닫습니다. 조명을 시작하려면 "시작"을 누르십시오. 조명 후, 조명기에서 처리 세트를 제거합니다. 조명기가 자동으로 처리 혈소판 장치 (들)에 대한 치료 보고서를 인쇄합니다. 주최자의 용기 포장을 푸는와 P에 목을 매latelets 및 가공 세트, 조명 컨테이너의 출구에서 캐뉼라을 아프게하고, 혈소판은 화합물 흡착 장치 (CAD) 용기에 흐를 수 있습니다. 플라즈마 추출기를 사용하여 조명 컨테이너에 CAD 컨테이너에서 공기를 표현, CAD 웨이퍼를 구부리 않도록주의를 즐길 수도 있습니다. CAD 컨테이너의 입구 포트에 근처에있는 튜브를 밀봉합니다. 제거하고 빈 조명 컨테이너를 폐기하십시오. 최소 6 시간의 혈소판 교반기에 첨부 된 저장 용기와 CAD 컨테이너,하지만 이상 16 시간을 놓으십시오. 이 ≤ 2 μm의 농도에 잔류 amotosalen의 감소가 발생합니다. CAD 치료 후 교반기에서 혈소판 단위를 제거합니다. 혈소판을 잡아. 캐뉼라을 해제하고 혈소판의 저장 용기로 유동 할 수 있습니다. CAD 컨테이너에 저장 용기에서 공기를 표현한다. 잔여 혈소판 농축 흐름 다시 저장 용기에 의한하자중력. Y-피팅 위의 튜브를 밀봉하고 빈 CAD 컨테이너를 제거합니다. 필요에 따라 저장 용기 사이 재배포 볼륨입니다. 볼륨 조정은 저장 용기의 무게에 의해 만들어집니다. 몇 센티미터에 저장 용기의 입구 위의 각 스토리지 컨테이너에 튜브를 밀봉, 5.2에 설명 된대로이 최종 제품에서 멸균 샘플을 확보 용이하게한다. 5. 제품 샘플링 일상적인 QC 테스트의 경우 최종 저장 용기는 저장 용기의 샘플링 주머니를 사용하여 한 번에 맛보실 수 있습니다. 이렇게하려면 혈소판 장치가 잘 혼합되도록 한 후 주머니에 클램프를 열고 여러 번 당겨 요. 주머니는 혈소판이 가득 한 후 튜브를 밀봉합니다. 적절한 실험실 튜브에 혈소판 샘플을 전송하고 즉시 assays을 수행합니다. 이러한 검증 연구로, 저장의 과정을 통해 여러 시간 지점에서 샘플을 구하려면 무균 연결혈소판 저장 용기의 튜브에 새로운 샘플링 컨테이너. 혈소판이 잘 샘플링 컨테이너에 전송하기 전에 혼합되어 있는지 확인합니다. 6.에서 체외 기능 평가 이 검증 연구를 들어, 체외 평가에서 CAD 처리 (1 일 또는 2 일, CAD 기간에 따라 다름) 후 다시 4 일에 수행 된 (또는 5 일)과 일 7. 체외 측정에서 볼륨, 혈소판 수, pH를, 포함 혈액 가스 (PO 2, PCO 2), 포도당, 젖산, 그리고 회전. 볼륨 첨가제 솔루션에서 혈소판의 비중으로 1.01 g / ML을 사용하여 무게에 의해 결정되었다. 헤모글로빈 오염은 색상 차트로 비교를 사용하여 시각적으로 평가되었습니다. 회전은 시각적으로 산출 된 것입니다. 다른 assays의 방법론에 대해 "장비의 표"를 참조하십시오. 7. 대표 결과 d를 생산하는 과정ouble 복용 버피 코트 혈소판은 볼륨과 혈소판에 대한 목표 사양을 충족 개별 버피 코트의 생산을 시작합니다. 이 최종 공정에서는 정품 확인을 통해 개별 버피 코트의 혈소판을 측정 할 실질적인하지 않습니다, 우리는 우리가 지속적으로 대상 볼륨과 혈소판을 충족 할 수 있도록하기 위해 버피 코트를 최적화하기 위해 별도의 노력을 사업으로 시작했다. 표 1에 도시 된 바와 같이, 우리의 최적화 된 버피 코트 46에서 볼륨 및 혈소판 모두 ± 2 ML 37 ± 3 %, 각각의 대상 값으로 호의를 비교했다. 풀링 후, 버피 코트 풀의 볼륨과 혈소판은 각각 부드러운 회전 원심 분리하기 전에 약 600 ML 20 %해야합니다. 표 2에 도시 된 바와 같이, 우리의 버피 코트의 수영장 615 평균 ± 5 ML을, 혈소판 수치가 19 평균 ± 1 %입니다. 더블 선량 혈소판의 conc의 부드러운 회전 원심 분리 결과차단 혈액 시스템 DS 처리 설정을 사용 병원체 불 활성화에 대한 입력 요구 사항을 충족합니다 entrate. 차단 치료를 위해 주요 입력 매개 변수는 볼륨, 혈소판 수, 플라즈마 비율 및 RBC 내용이 포함되어 있습니다. 또한, 우리는 버피 코트 수영장에 비해 혈소판 농축액에있는 혈소판의 ≥ 75 %를 복구하는 것을 목표로하고 있습니다. 지역 요구 사항에 따라, 백혈구 (WBC) 오염은 <1×10 6 / 단위 수 있어야합니다. 혈소판의 검증에 집중이 가로 치료뿐만 아니라 백혈구 오염 및 표 3에 도시 된 바와 같이 혈소판 복구 목표에 대한 주요 매개 변수를 만났다. 병원체 불 활성화에 대한 요격 과정은 하나의 가로 채기 처리 설정을 사용하여 두 번 복용 혈소판 농축액에 수행됩니다. 처리 세트는 처리 장치가 경로의 완성에 두 개인의 치료 혈소판 투여로 분할 할 수 있도록이 통합 저장 용기를 포함ogen의 불 활성화 과정. 유럽 ​​가이드 라인은 테스트 단위의 75 %가 ≥ 200×10 9 혈소판을 포함 할 것을 요구 당 치료 dose1, 스웨덴 지역의 요구 사항이 테스트 단위의 75 %가 포함> 복용량 당 240×10 9 혈소판이 필요합니다. 차단 치료 후 평균 혈소판 내용은 265이었다 ± 22 X10 9 (n은 = 24). 또한, 단위의 88 %가 만족 또는 치료 복용량 당 240×10 9 혈소판을 초과,이은 유럽 지침 및 스웨덴어로 규정 모두에서 잘 수 있습니다. 이중 복용량 버피 코트의 준비와 각각 차단 처리 프로세스의 그림을위한 그림 1 & 2를 참조하십시오. 이 확인을 위해, 우리는 혈소판의 체외 특성의이 차단 처리 (개별 저장 용기에 분할 한 후 예를 들면) 이후에 중점을 측정, 매개 변수는 저장 용량이 7 일 동안 측정 하였다. 평균과 표준 편차는에 수집 된혈소판 투여 량, 산도, PO 2, PCO 2, 젖산 생산과 포도당 소비. 그림 3은 저장 후 7 일 이상 차단 치료 후 분할 제품의 각 차단 치료와 평균 혈소판 복용하기 전에 두 번 복용 혈소판 농축액의 혈소판 투여를 시작하는 의미를 보여줍니다. 저장 중 혈소판 손실은 약 9 %이다. 이 감소는 기존 혈소판의 저장 기간 동안 혈소판의 예상 손실의 차이가 있습니다.이 표 4는 하나의 단위로 처리 및 분할 후 차단 혈소판의에서 체외 특성을 요약 한 것입니다. 유럽​​ 요구 사항에 따라, 혈소판의 pH는 유통 기한의 끝 부분을 통해 6.4 이상 남아 있어야합니다. 처리 과정에서 혈소판의 pH가 약간 혈소판 농도, 양, 그리고 혈소판 스토의 가​​스 투과성을 기반으로 떨어 집중분노의 컨테이너. 그림 4는 저장 7 일에 걸쳐 분할 혈소판 제품의 pH를 보여줍니다. 저장하는 동안 pH는 안정적이고 잘 처리 요구 사항 내에서 유지. 으로 인물 5A 및 5B, 혈소판 O이 소비와 CO 2 생산에 표시된 저장 후 7 일 동안 PL2410 컨테이너에서 차단 혈소판에 의해 계속 호흡을 나타냅니다. 숫자는 6A 및 6B 스토리지 7 일 동안 젖산과 포도당 수준을 보여 . 혈소판 포도당 소비와 젖산 생산은 스토리지의 7 일 동안 서로 일치합니다. 5 단위는 포도당 수준 이하 1.11 mmol / L을 (포도당 분석에 대한 낮은 제한)했다. 특히, 볼륨, 혈소판 수, 플라즈마 비율, 빨간색 파, 버피 코트의 준비와 풀링을 검증 제작 혈소판 그런 일이 도청 치료에 대한 입력 기준을 충족 집중ood 세포 오염. 최종 단위는 혈소판 복용과 산도 등의 스토리지를 7 일 동안 유효성 검사 기준을 만났습니다. 매개 변수 대상 범위 결과 ± SD 평균 볼륨 (ML) ~ 48 46 ± 2 혈소판 (%) ~ 37 37 ± 3 풀링하기 전에 시간을 잡아 교반기에서 숙박 교반기에서 숙박 개인 버피 코트 (N = 19)의 표 1. 특성. 매개 변수 대상 범위 결과 ± SD 평균 볼륨 (ML) ~ 600 615 ± 5 Hematocrit (%) ~ 20 19 ± 1 원심 분리하기 전에 시간을 잡아 교반기에서 1 시간 교반기에서 1 시간 버피 코트 풀 (N = 12)의 표 2. 특성. 매개 변수 목표 결과 ± SD 평균 볼륨 (ML) 370-420 404 ± 8 혈소판 수 (X10 9 / 단위) 250-700 577 ± 62 혈소판 복구 (%)를 평균 ≥ 75 75 ± 4 플라즈마 비율 (%) 32-47 38 ± 1 RBC (X10 6 / ML) ≤ 4 1.2 ± 0.4 WBC (X10 6 </s> / 단위 이상) ≤ 1 0.11 ± 0.1 차단 (시간) 전에 시간을 잡아 일 1 ≤ 끝 일 1 ≤ 끝 두 번 복용 혈소판의 표 3. 특성 (n은 = 12)을 중점을두고 있습니다. 평균 ± SD 최소 최대 볼륨 (ML) 199 ± 16 182 236 혈소판 수 (X10 9 / 단위) 265 ± 22 225 292 산도 (22 ° C) 6.9 ± 0.1 6.8 7.0 PO 2 (kPa) 21.4 ± 4.8 12.8 27.3 PCO 2 (kPa) 4.3 및 PLusmn, 0.4 3.3 4.9 락트산 (mmol / L) 9.1 ± 1.7 6.8 12.4 포도당 (mmol / L) 5.3 ± 0.9 3.7 6.5 차단 치료 혈소판의 1 일 / 2 (싱글 단위, N = 24)의 표 4. 특성. 그림 1. 7 버피 코트의 수영장에서 더블 선량 혈소판 농축 생산. 그림 2. 차단 혈액 시스템과 더블 선량 혈소판 농축액의 병원체 불 활성화. 그림 3. 전과에 대한 혈소판 투여 량을 평균차단 치료 후 7 일 (N 도청 이전 = 12; 차단 한 후 N = 24). 그림 4. 도청 처리 (N = 24) 이후에 혈소판 산도 ± SD를 의미합니다. 그림 5A는. 도청 처리 (N = 24) 이후 PO 2 ± SD를 의미합니다. 도 5B는. 도청 처리 (N = 24) 이후 PO 2 ± SD를 의미합니다. 그림 6A는. 도청 처리 (N = 24) 이후 젖산 수준의 ± SD를 의미합니다. 그림 6B는. 및 포도당 수준을 의미plusmn, SD 차단 처리 후 (N = 24).