INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

1. Tam Kan Toplama 450 ml üst gönüllü bağışçılardan kan toplayın / alt koleksiyonu lokal kan toplama kurallarına göre ayarlar. Tam kan santrifüjleme ve ayırmasından önce bir soğutucu plaka üzerinde 2 saat arasında, en az saklanır. 2. Buffy Coat Hazırlık Kırmızı kan hücreleri, buffy coat, ve plazma: üç kat içine kan ayırmak için bir sabit döndürme ile tam kan santrifüjleyin. Ikinci Santrifüj değerleri ± 2 ° C'de 22 dakika süreyle 4,880 11 RCF idi Toplama kaplarına buffy coat bırakarak, üst uydu çantası ve alt uydu torbaya kırmızı kan hücreleri (RBC) içine plazma ifade etmek için bir otomatik kan ayırıcı kullanılır. Buffy kat sırasıyla yaklaşık 48 ml ve% 37, olan hacim ve hematokrit aralıkları demek hedefleyin. Buffy-mont 22 ± 2 ° C'de trombosit karıştırıcı gecede saklanır <p class = "jove_title"> 3. Buffy Coat Pooling Steril connect 7 buffy mont ve paralel çizgiler bulunan bir tren yapılandırmada SSP + trombosit katkı çözeltisi (PAS), 300 ml tren uzunluğunu azaltmak için; PAS trenin üstünde olmalıdır. PAS ve ilk buffy coat arasındaki çizgi Kelepçe. Buffy coat birimler arasındaki steril bağlantıları açın ve buffy kat son kabın içine boşaltın. Kaynak ve PAS ve ilk buffy coat arasındaki kelepçesini açın. Katkı çözelti üçte biri sırayla buffy coat kapların her biri yoluyla durulama izin verin. 2 kez daha kalan PAS yarısını kullanarak her zaman tekrarlayın. Ortalama buffy coat havuz hacminin yaklaşık olarak 600 ml olmalıdır. Bireysel buffy kat hedef hacmi ve hematokrit yerine getirilirse, plazma oranı 32 olacak -% 47 daha sonra işlem içinde INTERCEPT patojen inaktivasyonu tedavisi için gerekli olduğu gibi. Boş SSP + ve buffy atınkat kaplar. Optimum trombosit kurtarma için, santrifüj önce 1 saat boyunca karıştırıcı üzerinde havuz tutmak. Steril buffy coat havuza entegre leukoreduction filtre ile trombosit saklama kabı bağlayın. Süspansiyon trombositlerin (9 dak, 20 sn için 462 RCF) gelen kırmızı kan hücreleri ayırmak için buffy coat havuz "yumuşak spin" gerçekleştirin. Trombosit saklama kabı içine leukoreduction filtre üzerinden otomatik bir kan ayırıcı kullanarak trombosit süspansiyonu ifade. 420 ml'lik hacim, 2,5-7,0 x 10 11 trombosit dozu ve ≤ 4 x 10 6 / ml kırmızı hücreleri – Daha önce açıklandığı gibi, işleme gereklilikleri trombosit süspansiyonu INTERCEPT 300 ml işleme özelliklerine uygun olduğundan emin olun. 4. Tedavi KESMENOKTASI Toplandıktan sonra, 1. Gün sonunda (gün 0 toplama günü) önce INTERCEPT tedaviyi gerçekleştirin. INTERCEPT İşleme Seti unwrapŞeffaf plastik torbadan Çift Saklama Kapları ile. Steril INTERCEPT işleme sette amotosalen kabın hortumuna trombosit süspansiyonu konteyner bağlayın. Yerel gereksinimler aşağıdaki uygun kan ürünü tanımlama ile INTERCEPT işleme seti saklama kapları etiketleyin. Trombositler asın ve aydınlatma kabına akmaya amotosalen çözüm sağlayan, ilk amotosalen kapsayıcısındaki alt kanül bölünürler. Trombositler aydınlatma kabına amotosalen konteyner akmasına izin amotosalen kapsayıcısındaki üst kanül kırın. Yavaşça trombosit ve amotosalen karışımı karıştırın ve amotosalen kabına aydınlatma kabından hava ifade. Hortumun yaklaşık 4 cm, doldurma borusuna trombosit karışım küçük bir miktar ifade eder. Bu tüp ve aydınlatma kabı hem de trombositler patojen inactivati ​​geçmesi sağlanırtedavi. Aydınlatma konteyner ve amotosalen konteyner arasındaki boru mühürleyin. Aydınlatma konteyner uzanan boru yaklaşık 4 cm'den daha bırak. Çıkarın ve atın boş trombosit ve amotosalen kaplar ve örnekleme torbalar üzerindeki kelepçe kapatın. Soldaki büyük bölme içinde aydınlatma kap ve sağ tarafta daha küçük bölme içinde düzenleyici ile aydınlatıcı içine işleme grubu yerleştirin. Aydınlatıcı içine bağışı kimliği, ürün kodu, ve işleme set lot numarası girmek için el barkod aygıtı kullanın. Metal kapağını kapatın ve aydınlatıcı grafik arayüzü istendiğinde, çekmeceyi kapatın. Aydınlatma başlatmak için "Başlat" düğmesine basın. Aydınlatma sonra aydınlatıcıdan işleme seti kaldırın. Aydınlatıcı otomatik işlenmiş trombosit birim (ler) için tedavi raporu yazdırır. Organizatörü konteyner açmak ve p asmaklatelets ve işlem seti, aydınlatma kabın çıkışındaki kanül kırmak ve trombositler bileşik emme cihazı (CAD) bir kaba akmasına izin verir. Bir plazma çıkarıcı kullanarak aydınlatma kabına CAD kabından hava ifade, CAD gofret eğmemeye bakımı. CAD konteynerin giriş noktasına yakın boru kapatılmalıdır. Çıkarın ve boş aydınlatma kabı atın. En az 6 saat boyunca bir karıştırıcı üzerinde trombosit bağlı depolama kapları ile CAD konteyner, ancak en fazla 16 saat yerleştirin. Bu ≤ 2 uM'lik bir konsantrasyona kalıntı amotosalen azalma ile sonuçlanacaktır. CAD Tedaviden sonra, karıştırıcı gelen trombosit birimleri çıkarın. Trombositler asın. Kanül kırın ve trombosit saklama kapları içine akmasına izin verin. CAD kabına saklama kapları havayı ifade eder. Rezidüel trombosit konsantresi geri akışı saklama kapları içine tarafından Letyerçekimi. Y-uydurma Yukarıda tüp mühür ve boş CAD kabı çıkarın. Gerektiği gibi saklama kapları arasındaki yeniden dağıtın hacmi. Cilt ayarlamalar depolama konteynerleri tartı ile yapılır. Bir kaç santimetre saklama kabının giriş yukarıdaki her bir depolama konteyner için hortum mühür; 5.2 'de tarif edildiği gibi bu, son ürünün bir steril bir örnek elde kolaylaştırır. 5. Ürün Örnekleme Rutin QC test için nihai depolama kapları saklama kapları üzerinde örnekleme kese kullanılarak kez tadılabilir. Bunu yapmak için, platelet birim iyice karıştırılmış sağlamak, daha sonra torba için kelepçeyi açmak ve birkaç kez sıkın. Kese trombositler ile doldurduktan sonra tüp mühürleyin. Uygun bir laboratuvar tüpüne trombosit örneği aktarın ve hemen testleri gerçekleştirin. Bu tür bir çalışmada, doğrulama için olduğu gibi, depolama boyunca birden çok zaman noktasında örnekler elde etmek için, steril bağlamakTrombosit saklama kabı boru için yeni bir numune kabı. Trombositler de örnekleme konteynere aktarmak için önce karıştırılmalıdır emin olun. 6. In vitro Fonksiyonunun Değerlendirilmesi Bu validasyon çalışması için, in vitro değerlendirilmesi CAD tedavisi (Gün 1 veya Gün 2, CAD süresine bağlı olarak) sonra tekrar 4. Gün yapıldı (veya Gün 5) ve Günlük 7. Vitro ölçümlerde hacmi, trombosit sayımı, pH, dahil kan gazı (pO 2, pCO 2), glikoz, laktat ve dönen. Cilt katkı maddesi çözelti içinde, trombositler 'in özgül ağırlık olarak 1.01 g / ml ile ağırlık ile tespit edildi. Hemoglobin kontaminasyon bir renk skalası ile karşılaştırma kullanılarak görsel olarak değerlendirildi. Dönen bir görsel olarak tespit edilmiştir. Diğer testlerin metodolojisi için "ekipman Tablosu" na bakınız. 7. Temsilcisi Sonuçlar D üretme süreciouble doz buffy coat trombosit hacmi ve hematokrit için hedef özelliklerine uygun bireysel buffy mont üretimi ile başlar. Bu son işlem doğrulama sırasında bireysel buffy kat hematokrit ölçmek için pratik olmadığı gibi, biz sürekli olarak hedef hacmi ve hematokrit karşılamak olabilir sağlamak için elimizden buffy kat optimize etmek için ayrı bir çaba üstlenerek başladı. Tablo 1 de gösterildiği gibi, Optimize buffy kat 46, hacim ve hematokrit her ikisi de ± 2 ml ve 37 ±% 3, sırasıyla için hedef değerleri ile karşılaştırıldığında olumlu. Havuzlama sonra, buffy coat havuz hacminin ve hematokrit, sırasıyla, yumuşak sıkma santrifüj işleminden önce yaklaşık olarak 600 mL% 20 olmalıdır. Tablo 2 de gösterildiği gibi, havuzlar buffy coat 615 ortalama ± 5 ml; hematokrit 19 ortalama ±% 1. Bir çift doz trombosit kons içinde yumuşak sıkma santrifüj sonuçlarıINTERCEPT Kan Sistemi DS işleme seti kullanılarak patojen inaktivasyonu için girdi şartlarını karşılayacak entrate. INTERCEPT tedavi için anahtar giriş parametreleri hacmi, trombosit, plazma oranı ve RBC içerik bulunmaktadır. Ayrıca, buffy coat havuzu ile karşılaştırıldığında trombosit konsantresi içinde trombositlerin ≥% 75 kurtarmak hedefliyoruz. Yerel gereksinimlere Per, beyaz kan hücresi (WBC) kirlenme <1×10 6 / birim olmalıdır. Trombosit, doğrulama içinde konsantre KESMENOKTASı tedavisi yanı sıra WBC kirlenme ve Tablo 3'te gösterildiği gibi trombosit kurtarma için hedefler için anahtar parametreler araya. Patojen inaktivasyonu için INTERCEPT işlemi tek bir INTERCEPT işleme seti kullanarak çift doz trombosit konsantresi yapılır. Işlem seti, tedavi edilen birim yol tamamlanmasından az iki ayrı terapötik trombosit doz halinde bölünebilir izin veren iki tamamlayıcı depolama konteynerleri içermektedirogen inaktivasyonu süreci. Avrupa yönergeleri test birimlerinin% 75 ≥ 200×10 9 trombositler içermesini gerektirir başına terapötik dose1; İsveç'teki yerel gereksinimler test birimlerinin% 75 içerdikleri> doz başına 240×10 9 trombositler gerektirir. INTERCEPT Tedaviden sonra, ortalama trombosit içeriği 265 oldu ± 22 x10 9 (n = 24). Ayrıca, ünitelerin% 88 yerine veya terapötik doz başına 240×10 9 trombositler aştı; Bu Avrupa yönergeleri ve İsveç yasalarına hem dahilindedir. Çift doz buffy coat hazırlanması ve sırasıyla KESMENOKTASı tedavi süreçlerinin bir örnek için Şekil 1 ve 2'ye bakınız. Bu doğrulama için, trombosit in vitro özellikleri INTERCEPT tedavisi (bireysel depolama kapları içine bölünmüş sonra yani) sonra konsantreleri ölçülür; parametreleri depolama 7 gün boyunca ölçüldü. Ortalama ve standart sapma için toplandıtrombosit dozunun, pH, pO2, pCO 2, laktat üretim ve glukoz tüketimi. Şekil 3, depolama, 7 gün boyunca KESMENOKTASı tedavi sonrası bölünme ürünlerinin her biri içinde KESMENOKTASı tedavi ve ortalama trombosit doz verilmeden önce iki doz trombosit konsantresi trombosit başlangıç ​​dozu ortalaması gösterilmiştir. Depolama sırasında Trombosit kaybı yaklaşık% 9 idi. Bu azalma konvansiyonel trombositlerin depolama sırasında trombositlerin beklenen kayıp farklı değildir. 2 Tablo 4 tek birimler halinde tedavi ve bölme sonra INTERCEPT trombositlerin in vitro özelliklerini özetlemektedir. Avrupa standartlarına Per, trombositlerin pH raf ömrünün sonuna kadar 6.4 üzerinde kalmalıdır. Işlem sırasında, trombosit pH değeri hafifçe trombosit konsantrasyon, ses ve trombosit sto gaz geçirgenliği esas damla konsantreöfke konteyner. Şekil 4, depolama, 7 gün boyunca bölünmüş trombosit ürünlerin pH göstermektedir. Depolama sırasında, pH kararlı olduğunu ve iyi işleme ihtiyaç içinde yapılmaktadır. Olarak Şekil 5A ve 5B, trombosit O2 tüketimi ve CO 2 de gösterildiği depolama 7 gün boyunca PL2410 kap içinde INTERCEPT trombositlerinde solunum devam etmektedir. Şekil 6A ve 6B, depolama, 7 gün boyunca laktat ve glikoz düzeyleri göstermektedir . Trombosit glukoz tüketimi ve laktat üretimi depolama 7 gün boyunca birbirleri ile tutarlıdır. 5 birim glikoz seviyesi daha az 1.11 mmol / l (glükoz tahlil için alt sınır) vardı. Özellikle, hacmi, trombosit, plazma oranı ve kırmızı bl; buffy coat hazırlanması ve havuzlama doğrulama üretilen trombosit olduğunu KESMENOKTASı tedavisi için giriş kriterlerini karşılayan konsantreleriood hücre kontaminasyonu. Nihai birimleri trombosit dozu ve pH dahil depolama 7 gün içinde geçerlilik kriterlerini karşıladı. Parametre Hedef Aralığı Sonuçlar ± SD Hacim (ml) ~ 48 46 ± 2 Hematokrit (%) ~ 37 37 ± 3 Havuzlama önce zaman tutun Karıştırıcı üzerinde Overnight Karıştırıcı üzerinde Overnight Bireysel Buffy Palto (n = 19) Tablo 1. Özellikler. Parametre Hedef Aralığı Sonuçlar ± SD Hacim (ml) ~ 600 615 ± 5 Hematocrit (%) ~ 20 19 ± 1 Santrifüj önce zaman tutun Karıştırıcı üzerinde 1 saat Karıştırıcı üzerinde 1 saat Buffy Coat Havuzları (n = 12) Tablo 2. Özellikler. Parametre Hedef Sonuçlar ± SD Hacim (ml) 370-420 404 ± 8 Trombosit sayımı (x10 9 / birim) 250 – 700 577 ± 62 Trombosit kurtarma (%) Ortalama ≥ 75 75 ± 4 Plazma oranı (%) 32-47 38 ± 1 RBC (x10 6 / ml) ≤ 4 1.2 ± 0.4 WBC (x10 6 </s> / birim) ≤ 1 0.11 ± 0.1 INTERCEPT (saat) önce zaman tutun Günde 1 ≤ sonu Günde 1 ≤ sonu Çift Doz Trombosit Tablo 3. Özellikleri (n = 12) konsantreler. Ortalama ± SD Min Maksimum Hacim (ml) 199 ± 16 182 236 Trombosit sayımı (x10 9 / birim) 265 ± 22 225 292 pH (22 ° C) 6.9 ± 0.1 6.8 7 pO 2 (kPa) 21.4 ± 4.8 12.8 27.3 pCO 2 (kPa) 4.3 & plusmn; 0.4 3.3 4.9 Laktat (mmol / l) 9.1 ± 1.7 6.8 12.4 Glukoz (mmol / l) 5.3 ± 0.9 3.7 6.5 INTERCEPT Tedavi Trombositler Gün 1/2 (Tek Üniteleri, n = 24) Tablo 4. Özellikler. Şekil 1. 7 buffy kat havuzundan bir çift doz trombosit konsantresi üretimi. Şekil 2. INTERCEPT Kan Sistemi ile çift doz trombosit konsantresi Patojen inaktivasyon. Şekil 3. Önce ve için trombosit dozu ortalamaINTERCEPT uygulamadan sonra 7 gün (n KESMENOKTASı önce = 12; KESMENOKTASı sonra n = 24). Şekil 4. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra trombosit pH ± SD. Şekil 5A. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra pO 2 ± SD. Şekil 5B. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra pO 2 ± SD. Şekil 6A. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra laktat düzeyleri ± SD. Şekil 6B. & Glukoz düzeyi ortalamaplusmn; SD KESMENOKTASI tedaviden sonra (n = 24).