O transplante hepático em ratos é um modelo indispensável experimental para a pesquisa biomédica. Aqui apresentamos nossos procedimentos cirúrgicos para transplante ortotópico do fígado do rato com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50%.
O transplante hepático (OLT) em ratos usando um enxerto total ou parcial é um modelo indispensável para a pesquisa experimental de transplante, como estudos sobre a preservação do enxerto e isquemia-reperfusão 1,2 lesão, respostas imunológicas 3,4, 5,6 hemodinâmica e pequeno para a dimensão síndrome 7. A OLT rato está entre os modelos animais mais difíceis em cirurgia experimental e exige técnicas de microcirurgia avançados que levam muito tempo para aprender. Por conseguinte, a utilização deste modelo tem sido limitada. Desde a confiabilidade e reprodutibilidade dos resultados são os principais componentes dos experimentos em que esses modelos animais complexos são usados, é essencial para os cirurgiões que estão envolvidos em OLT rato a ser treinados nos procedimentos de bem-padronizados e sofisticado para esse modelo.
Embora várias técnicas e modificações do OLT em ratos foram descritos 8 uma vez que o primeiro modelo descreviaed por Lee et al. 9 em 1973, a eliminação da reconstrução arterial hepática 10 e da introdução da técnica de anastomose cuff por Kamada et al. 11 foram um grande avanço neste modelo, uma vez que os procedimentos de reconstrução simplificada, em grande . No modelo de Kamada et al., O rearterialization hepática foi também eliminado. Desde ratos podem sobreviver sem fluxo arterial hepática após transplante de fígado, houve uma considerável controvérsia sobre o valor de arterialização hepática. Contudo, a superioridade fisiológica do modelo arterializado tem sido cada vez mais reconhecido, especialmente em termos de conservação do sistema biliar 8,12 e a integridade hepática 8,13,14.
Neste artigo, apresentamos detalhados procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de OLT com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50% após a ressecção hepática ex vivoção. Os procedimentos de reconstrução para cada navio e do ducto biliar são realizados pelos métodos seguintes: uma sutura de polipropileno 7-0 contínuo para a supra-infra e veia cava inferior, uma técnica de manga para a veia porta, e uma técnica de stent na artéria hepática e ducto biliar.
O primeiro modelo de rato OLT foi relatado por Lee et al. Em 1973 9, em que todos os recipientes, incluindo a artéria hepática foram reconstruídos por um método costuradas a mão e o desvio portossistêmico extracorpórea foi utilizado. Este modelo foi tecnicamente complicado e difícil de realizar. O modelo seguinte foi um sem reconstrução da artéria hepática e da derivação extracorpórea, desenvolvido pelos mesmos autores 10 em 1975. Posteriormente, em 1979, Kamada et al. Introduziu a técnica de anastomose manguito para o modelo sem rearterialization hepática 11. Com estas modificações, OLT em ratos foi simplificada com um tempo anepática encurtado em operações ao receptor e tem sido amplamente utilizado como modelo experimental.
No entanto, tem havido uma considerável controvérsia uma vez que, em seguida, sobre o significado de arterialização hepática em ratos OLT 8 porque a arterialização foi uma tarefa exigente, mas did não afeta a sobrevivência após o transplante. Numerosos estudos sobre arterialização hepática utilizando técnicas de reconstrução várias foram relatadas 8, tal como uma anastomose do segmento de aorta 3,9,17-aórtico, uma técnica de anastomose cuff 18,19,20, uma técnica telescópica 5, uma técnica de stent 13, 16, e uma técnica de anastomose manga 12,21-23. Embora a técnica de OLT rato ainda não está padronizado hoje, o modelo arterializado tem sido cada vez mais favorecida em termos de sua superioridade fisiológica 8,12,13,14. Entre as técnicas acima mencionadas, uma técnica de stent que é simples e rápido de executar foi relatada por Lehmann et al. 16 em 2005. O estudo mostrou excelentes resultados: não foi observado grau de oclusão na artéria hepática reconstruído menos 8 h, 24 h, e 6 meses após a reperfusão. Por isso, adotou essa técnica para arterialização hepática.
Nós desempenhoma anastomose costurado à mão para a reconstrução do SHVC e IHVC. Este método fornece o local da anastomose, com uma óptima condição fisiológica, o que leva à redução da incidência de trombose 8, e é o melhor simulação microcirurgia e de formação para os cirurgiões. Além disso, a anastomose pode ser possível mesmo com cotos dos vasos pequenos. No que diz respeito a anastomose de IHVC, este método não requer um IHVC longo do lado de enxerto em comparação com a técnica de anastomose manguito. Portanto, quando a veia renal doador é dissecada para fazer o enxerto IHVC tempo, este método é aplicável para o transplante de um enxerto que precisa de uma pequena IHVC longo, tal como um enxerto de 30%, que é constituída por lóbulos laterais direito e caudado com um curto intrahepática veia cava sem SHVC 2.
Em relação às técnicas de ressecção hepática em ratos, até hoje vários métodos têm sido relatados, as duas principais técnicas são a técnica de ligadura clássica massae a técnica de vaso-orientado 24. Realizamos a técnica clássica para a ligadura ressecção hepática de 50% de 15, mas com um microscópio cirúrgico, para tornar o procedimento mais finas, e para evitar danos nos lobos remanescentes e estruturas.
Descrevemos os resultados representativos dos ratos receptores no nosso modelo, os ratos sobreviveram durante o período de observação de 7 dias sem complicações aparentes. O modelo pode ser modificado para fins diferentes de experiências, escolhendo as configurações diferentes, como o armazenamento frio prolongado, isquemia quente prolongado que inclui a doação após a morte cardíaca, ea utilização de enxertos menores de fígado ou enxertos de modelos experimentais de lesão hepática ou doenças.
Em nossa experiência, há três fatores-chave em todo os procedimentos que podem afetar a sobrevivência após o transplante, o parâmetro mais confiável para os resultados de OLT rato: a quantidade de perda de sangue, o tempo de operação, os eespecialmente tempo de pinçamento da veia porta e IHVC; ea adequação da reconstrução de cada navio, o que poderia resultar em trombose, estenose, ou sangramento. Em um período de treinamento deste modelo, a maioria das falhas provavelmente poderia estar relacionada a esses fatores. Neste artigo de vídeo, apresentamos passo-a-passo para os procedimentos cirúrgicos para o nosso modelo do rato de OLT parcial com reconstrução arterial hepática. Enquanto um modelo do rato de OLT é complicado e requer habilidades avançadas de microcirurgia, este artigo fornece uma abundância de informações práticas, que deve servir como um bom guia para a formação e aprendizagem deste modelo. Aprender este modelo eficaz é particularmente importante para a redução do período de aprendizagem, a redução do número de animais e dos custos necessários para a prática, e mais tarde reproduzir resultados fiáveis em experiências. Isto está em linha com o conceito 3R (substituição, redução e refinamento) dos experimentos com animais, o que foi postulado por Russell e Burch em1959 25.
The authors have nothing to disclose.
Os autores agradecem Pascal Paschenda e Mareike Schulz para a sua assistência técnica.
Name | Company | Catalogue number | Comments |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Light source | Schott | KL1500LCD | |
Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
Gauze swabs (5×5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
Scissors | AESCULAP | BC211W | |
Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |