쥐의 Orthotopic 간 이식은 생명 의학 연구에 필수적인 실험 모델입니다. 여기 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 orthotopic 쥐의 간 이식에 대한 수술 절차를 제시한다.
전체 또는 일부 그라프 트를 사용하여 쥐의 Orthotopic 간 이식 (올트)는 이러한 이식을 보존하고 국소 빈혈 reperfusion – 상해 1,2, 면역 반응 3,4, 혈류 역학 5,6에 대한 연구로 이식 연구에 필수적인 실험 모델이며, 소형에 대한 크기 증후군 7. 쥐 올트는 실험 수술에서 가장 어려운 동물 모델들입니다 배울 수있는 시간이 오래 걸릴 고급 microsurgical 능력을 요구합니다. 따라서,이 모델의 사용이 제한되었습니다. 결과의 신뢰성 및 재현성 이러한 복잡한 동물 모델이 사용되는 실험의 핵심 구성 요소입니다 때문에,이 모델에 잘 표준화하고 정교한 절차에서 훈련 할 쥐 올트에 관련된 의사 필수적입니다.
첫 번째 모델은 describ 때부터 다양한 기술과 쥐의 올트의 수정은 8을보고되었지만그들은 정말 좋은 정도 재건 절차를 단순화하기 때문에 리 외하여 에드. 1973 년 9 간장 동맥 재건 10 Kamada 외하여 커프 문합 기술의 도입을 제거. 11,이 모델의 주요 발전했다 . Kamada 외.에 의해 모델에서 간 rearterialization도 제거되었습니다. 쥐가 간 이식 후 간장 동맥 흐름없이 살아남을 수 있기 때문에 간 arterialization의 가치 이상의 상당한 논란이 있었다. 그러나, arterialized 모델의 생리적 우수성이 점점 특히 담즙 덕트 시스템 8,12, 간 무결성 8,13,14를 보존의 관점에서, 인정되었습니다.
이 문서에서는, 우리는 예 생체 간 resec 후 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 올트의 쥐 모델에 대한 자세한 수술 절차를 제시기. 과와 간장 동맥에 대한 스텐트 기술, 포털 정맥의 커프 기술, 위에와 infrahepatic 대정맥에 7-0 폴리 프로필렌 연속 봉합 : 각 혈관과 담즙 덕트의 재건 절차는 다음과 같은 방법으로 수행됩니다 담즙 덕트.
쥐 올트의 첫 번째 모델은 리 외에 의해보고되었다. 1,973 9, 간장 동맥을 포함한 모든 선박은 손 놓은 방법으로 재건되었으며 extracorporeal portosystemic 션트가 사용 된 인치 이 모델은 기술적으로 복잡하고 수행하는 것이 어려웠습니다. 다음 모델은 1975 년 10 동일한 저자에 의해 개발 된 간장 동맥 재건 및 extracorporeal 션트없이 하나했습니다. 그 후 1979 년, Kamada 외이 있습니다. 간 rearterialization 11없이 모델에 대한 커프 문합 기술을 도입했습니다. 이러한 수정을 통해 쥐의 올트받는 작업의 단축 anhepatic 시간으로 단순화 된 널리 인정 실험 모델로 사용되었습니다.
arterialization가 까다로운 작업했지만하지만,이 쥐의 간 arterialization 올트 8 중요성으로 이후 많은 논란이있었습니다 디이식 후 생존에 영향을 미치지 싶네요. 다양한 재건 기술을 이용하여 간 arterialization에 대한 많은 연구가 이러한 대동맥 세그먼트 – 투 – 대동맥 문합 3,9,17, 커프 문합 기술 18,19,20, 텔레 스코핑 기법 (5), 스텐트 기술 13 등 8,보고되었습니다 16, 및 슬리브 문합 기술 12,21-23. 쥐 올트에 대한 기술이 오늘날 표준화되지 않지만, arterialized 모델은 점점 더 그 생리 우위 8,12,13,14의 관점에서 선호하고 있습니다. 위에서 언급 한 기술 중 수행 할 간단하고 빠르 스텐트 기술은 레만 외에 의해보고되었다. 2005 년 16. 연구는 우수한 결과를 보여 주었다 : 더 가림 율은 reperfusion 후 8 시간, 24 시간, 6 개월에서 복원 간장 동맥에서 관찰되지 않았습니다. 따라서 간 arterialization이 기술을 채택했다.
우리는 perforSHVC와 IHVC의 재건을위한 mA 손집니다 문합. 이 방법은 혈전증 8 감소 발생에 이르게 최적의 생리 상태와 anastomotic 사이트를 제공하고 최고의 미세 시뮬레이션 및 의사에 대한 교육입니다. 또한, 문합는 짧은 선박 stumps 가능 할 수 있습니다. IHVC의 문합에 대하여,이 방법은 커프 문합 기술에 비해 이식 측면에 긴 IHVC을 필요로하지 않습니다. 따라서 기증자 신장 정맥이 오래 이식 IHVC를 만들기 위해 해부를 할 때,이 방법은 짧은 intrahepatic과 오른쪽 측면과 꼬리가있는 엽으로 구성되어 30 %의 이식과 같은 긴 IHVC을 필요로 작은 이식의 이식 적용됩니다 SHVC이없는 대정맥.
여러 가지 방법을 현재까지 쥐에서 간 절제술의 기술에 관한 것이보고되었습니다, 두 가지 주요 기술은 전통적인 대량 봉합사 기술 아르그리고 선박 중심의 기술 24. 우리는 50 % 간 절제술 15 클래식 봉합사 기술을 수행하지만, 수술 현미경 절차 미세한를하고, 나머지 엽과 구조에 대한 손상을 방지 할 수 있습니다.
우리는 우리의 모델에서받는 쥐의 대표 결과를 설명하고, 쥐가 명백한 합병증없이 7 일간 관찰 기간 동안 살아 남았습니다. 모델은 같은 장기간 냉장, 심장 사후 기증을 포함 연장 따뜻한 국소 빈혈 및 간 부상 또는 질병의 실험 모델에서 작은 간 이식 또는 이식의 사용과 같은 다른 설정을 선택하여 실험의 다른 목적으로 수정할 수 있습니다.
, 운영 시간, 전자 출혈의 양 : 우리의 경험에서, 이식, 쥐 올트의 결과에 대해 가장 신뢰할 수있는 매개 변수를 한 후 생존에 영향을 미칠 수있는 절차를 통해 세 가지 핵심 요소가 있습니다특히 포털 정맥과 IHVC 시간을 클램핑하고, 각 선박의 재건의 적절성은 어느 협착증, 혈전증이 발생할 수, 또는 출혈이. 이 모델의 연수 기간에서 실패의 대부분은 아마도 이러한 요인과 관련이있을 수도 있습니다. 이 비디오 문서에서는, 우리는 간장 동맥 재건과 일부 올트 우리의 쥐 모델에 대한 수술 절차에 대한 단계별 지침을 제시한다. 올트의 쥐 모델이 복잡하고 고급 microsurgical 기술을 필요로하는 반면,이 문서에서는이 모델의 교육 및 학습을위한 좋은 가이드 역할을해야 실질적인 정보를 충분히 제공합니다. 효율적으로이 모델을 학습하면 학습 기간을 단축 연습에 필요한 동물과 비용의 수를 줄이고, 나중에 실험에서 신뢰할 수있는 결과를 재현을 위해 특히 중요합니다. 이에 러셀과 버치가 postulated 된 동물 실험의 3Rs 개념 (교체, 감소, 및 개선)와 라인에1959 25.
The authors have nothing to disclose.
저자는 기술 지원을 위해 파스칼 Paschenda과 Mareike Schulz 감사드립니다.
Name | Company | Catalogue number | Comments |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Light source | Schott | KL1500LCD | |
Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
Gauze swabs (5×5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
Scissors | AESCULAP | BC211W | |
Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |