我们演示了如何在细胞内游离钙离子浓度和突触效能的变化,可以同时监测神经节准备的<em>海兔</em>。我们的图像使用的荧光染料,钙奥兰治,用锋利的(细胞内)电极和诱导和监测突触传递的细胞内钙离子。
它已被建议的改变的细胞内钙介导诱导了一些重要的形式的突触可塑性(例如,单突触型长期便利)1。这些假设可以通过同时监测细胞内钙的变化和变更,在突触效能测试。我们演示了如何这可以通过与细胞内记录技术相结合钙成像。我们的实验是进行中的软体动物海兔夜蛾的口腔神经节。该制剂具有许多实验的有利特征:Ganglia可以很容易地从海兔中除去和实验用成人的神经元,使正常突触连接,并具有一个正常的离子通道分布。由于低代谢率的动物和相对低的温度(14-16℃),是天然的海兔 ,制剂是稳定的,很长一段时间。
一个直立的,固定的阶段,化合物使用显微镜用CCD照相机能够记录每秒30帧左右的图像神经元。在这个时间分辨率海兔是绰绰有余,即使只有一个尖峰诱导细胞内钙离子浓度的改变,来检测。同时,夏普电极用于诱导和记录确定前和突触后神经元突触传递的。在每次试验结束,自定义脚本,结合电生理和影像学资料。为了确保正确的同步,我们使用一个光脉冲从LED安装在显微镜的相机端口。操作突触前钙的水平(例如,通过细胞内EGTA注射),让我们来测试特定的假设,细胞内钙离子的作用,在调解各种形式的可塑性。
我们证明,可用于同时监测细胞内钙离子浓度和评价疗效突触传递的技术。这些技术是有用的,用于确定如何短期可塑性的各种形式的介导。
用荧光显微镜,CCD摄像机的摄像进行。这些设备的要求也比较适中相比,功能最全的成像设置。该技术简单,易于学习。虽然用CCD照相机的成像允许可视化的大面积具有良好的时间分辨率,空间分辨率是有限的。因此,它是一种有用的?…
The authors have nothing to disclose.
小灵通格兰特(MH51393)支持这项工作。 ,我们使用的一些海兔海兔的下RR10294迈阿密大学的研究资源,美国国立卫生研究院的国家中心提供的国家资源。
Table 1. Reagents used.
Table 2. Equipment used.