聚乙烯醇海绵模型植入

1。海绵的制备由0.9％（W / V）氯化钠水溶液中搅拌过夜水合物海绵。 消毒灭菌他们水合海绵。对于75毫升，高压灭菌25分钟121°C。 注：载入海绵具有如下所述的治疗是可选的。 在无菌罩与不育的仪器，从解决方案使用镊子拿起一个海绵。镊子挤压海绵和使用真空尖，尽可能消除尽可能多的解决方案，从海绵。在组织培养皿中放置了海绵拧干，小心离开海绵之间的空间。多个孔板，可用于区分不同的治疗方法。 直接到中心的海绵吸取的处理方案。海绵轻轻按下枪头后的解决方案已被放置在海绵上，这有助于海绵吸收的解决方案。注：6毫米直径2.75毫米厚的海绵，我们聘请的是能够容纳最多25μL。 板，他们在所有的海绵一旦被加载，可以存储在冰块，直到他们在植入老鼠。 2。外科手术适当麻醉动物和管理先发制人镇痛。整个过程将持续约20分钟，每头牲畜。对于30Ğ鼠标每分钟氧气的1.5升与1.5％异氟醚用于诱导和维持麻醉。当动物不再回应捏反射试验，在仰卧位在鼻锥的地方。使用电动剃须刀刮胡子1英寸1英寸面积上的低左肋下腹部。擦拭干净，剪去长发。 剃光面积的70％的酒精优碘清洗消毒。重复此优碘酒精清洗三次。 教而持有的皮肤，用手术刀作垂直切口直径的1.5-2倍要插入海绵米，是谨慎的，并非要削减通过体腔。 使用镊子，以保持皮肤的边缘，并慢慢开始使用Metzembaum剪刀切口两侧皮肤从肌肉中分离出来。口袋应该整个鼠标的宽度，从肋骨到后腿。 使用镊子，拿起第一个被放置在动物从两侧捏住海绵。海绵转移到直镊子，因此，它是从顶部和底部举行。 使用镊子，以保持皮肤的边缘和解除它，这样可以插入海绵。慢慢地插入海绵，尽量避免接触皮肤或肌肉下方的海绵将难以移动，一旦触及组织。重复所有的海绵。 一旦所有的海绵已经插入，地方两个或三个缝合关闭切口。使用一对镊子一起举行切口两侧和线程的苏图再通过两个层次的皮肤。拧紧第一个罚球刚够关闭皮肤边缘。完成一个从另一个方向，这个时候拉结紧罚的平结。然后把两个多平方海里，完成缝合（ 图2）。放置额外的缝合关闭整个切口。其他伤口粘接方法可用于如dermabond，伤口剪辑，或订书钉。 从动物麻醉系统和监控，而意识恢复。动物应尽快开始走动，并返回到前运算流动。确保他们能够充分达到食物和水。有些湿润的食物，可放置在笼，以协助恢复的底部。继续每天监测动物遇险或不适的迹象，检查切口部位的感染，炎症，和裂开。如果发现任何复苏的并发症，采取适当的行动。 3。可选注射液<p c姑娘="“jove_content”">注：一旦被植入到动物海绵，他们可以注入一个细胞，药物，生长因子等的解决方案，这使得在不同的交货时间和管理注入物质的影响分析制度。如果注射做了控制，应始终使用。 海绵注入所需的解决方案，首先要确定管理鼠标的物质的量。该物质需要集中，使注射量是不到一半的海绵可容纳的总体积。 准备一个注射器注射（我们用28Ğ针的的小鼠）。 将动物麻醉下接受注射。 当动物不再响应捏测试可以注射。 为了给推注射针，在45°的角度深入皮肤海绵中心。只去了一半的方式，然后推入针的海绵通过它的厚度。我们的目标是注入海绵确切中心。 进行检查，以确保针是海绵，慢慢抬起垂直针。如果针是海绵，海绵应该向上移动的针。 慢慢注入海绵取出针。如果有多个需要注射海绵很可能将被推迟，一些注射液注射前网站。 4。海绵去除注意：在海绵去除，处理时要格外小心海绵。避免穿透的海绵，手术器械和海绵，避免对周围组织周围的主要动脉防止失血过多。 动物是安乐死后，去除皮肤使用镊子和切口关闭海绵的海绵。 仔细分离的海绵，从周围的胶囊 ND避免收获额外的组织周围的海绵。如给药或形态分析，精度较差，需要切除。 5。代表结果删除海绵可以存储在不同的条件取决于将要执行的分析类型。对于切片，撷取海绵可以嵌入在一个中等的最佳切削温度（OCT）的化合物，如冻结或放置在10％福尔马林嵌入切片和石蜡块（ 图3A和B）。切片的最好结果，得到海绵时减少了一半整个直径和嵌入式切面（ 图4A和B）。应采取的海绵部分，使整个海绵宽度图3A显示了两个海绵，海绵左嵌入式/切片不正确，正确处理和正确的海绵。 耳鼻喉科“>海绵进行分析，可以放置在一个Eppendorf管中，并储存在-20°C，直到准备处理的RNA和实时定量PCR分析海绵应放置在一个Eppendorf管，闪光冻结，并存储在 – 80°C。此外，如从凯杰RNAlater RNA的防腐剂，可以稳定在较高温度下的安全储存的RNA。创面渗液多管挤海绵，可以收集，并汇集了流体多个海绵，以获得具有代表性的样本。活细胞，如成纤维细胞，巨噬细胞和淋巴细胞，也可以从海绵中提取，去除后从动物，海绵，可以在适当的媒体所需的细胞类型的地方。海绵可以处理物理（即切碎）或酶（如胶原酶）方法以释放细胞。 图1。脱水特德PVA海绵在三种不同尺寸的磁盘。 图2小鼠的伤口愈合模型显示侧切伤口的位置和四个聚乙烯醇海绵的图片。 图3。 （一）在4X H＆E染色和（B）三色染色切片石蜡嵌入海绵10X。 图4。 （一）在沿直径的一半海绵切割图片（B）PVA海绵一半，嵌入式削减10月朝下。