Imaging quantitativa di Lineage specifici Toll-like receptor-mediate Signaling in monociti e cellule dendritiche da piccoli campioni di sangue umano

Variazioni individuali nel determinare le risposte stato immunitario alle infezioni e contribuire alla gravità della malattia e il risultato. L'invecchiamento è associato ad un aumento della suscettibilità alle infezioni virali e batteriche e diminuita capacità di risposta ai vaccini con un ben documentato calo umorale e cellulo-mediata ^1,2 immune risposte. Abbiamo recentemente valutato gli effetti dell'invecchiamento sulla recettori Toll-like (TLR), componenti chiave del sistema immunitario innato che rilevano l'infezione microbica e di trigger antimicrobici risposte di difesa dell'ospite ^3. In un'ampia coorte di donatori umani sani, abbiamo dimostrato che i monociti di sangue periferico di pazienti anziani hanno una ridotta espressione e la funzione di alcuni TLR ⁴ e simili livelli di TLR ridotti e le risposte di segnalazione nelle cellule dendritiche (DC), cellule presentanti l'antigene che sono fondamentale nella il collegamento tra immunità innata e adattativa ^5. Abbiamo dimostrato di disregolazione TLR3 nei macrofagi unod minore produzione di IFN da parte di DCS donatori anziani in risposta ad infezione da West Nile virus ^6,7.

Paramount alla nostra comprensione del immunosenescenza e di intervento terapeutico è una comprensione dettagliata di specifici tipi cellulari che rispondono e il meccanismo di (s) di trasduzione del segnale. Gli studi tradizionali di risposte immunitarie, attraverso l'imaging di cellule primarie e marcatori cellulari di rilevamento di FACS o immunoblot hanno avanzato la nostra comprensione significativo, tuttavia, questi studi sono generalmente limitati tecnicamente dal volume piccolo campione a disposizione di pazienti e l'incapacità di condurre complesse tecniche di laboratorio su più campioni umani. ImageStream combina citometria a flusso con quantitativa simultanea digitale ad alta risoluzione di immagini e quindi facilita indagine in popolazioni di cellule multiple contemporaneamente per una acquisizione efficace della sensibilità del paziente. Qui si dimostra l'uso di ImageStream nei PVS per valutare TLR7 / 8attivazione-mediate aumento nella fosforilazione e traslocazione nucleare di un fattore di trascrizione chiave, NF-KB, che inizia la trascrizione di numerosi geni che sono critici per le risposte immunitarie ^8. Grazie a questa tecnologia, abbiamo anche recentemente dimostrato una alterazione precedentemente non TLR5 di segnalazione e il pathway NF-kB nei monociti da donatori anziani, che possono contribuire a una risposta immunitaria alterata nell'invecchiamento ^9.