यह वीडियो प्रोटोकॉल अलगाव और शल्य चिकित्सा resected मानव glioblastoma (जीबीएम) mutliforme ट्यूमर ऊतक कोशिकाओं से neurosphere परख संस्कृति पद्धति का उपयोग करके की तरह स्टेम के विस्तार को दर्शाता है.
स्तन, फेफड़ों, बृहदान्त्र, प्रोस्टेट, और मस्तिष्क के रूप में में ट्यूमर में स्टेम कोशिकाओं की तरह पृथक किया गया है. इन सभी ट्यूमर में एक महत्वपूर्ण मुद्दा glioblastoma mutliforme (जीबीएम) में विशेष रूप से, की पहचान करने और ट्यूमर की शुरुआत सेल की आबादी (ओं) को अलग करने के लिए ट्यूमर गठन, प्रगति, और पुनरावृत्ति में उनकी भूमिका की जांच करने के लिए है. समझना ट्यूमर सेल आबादी की शुरुआत के सुराग के लिए इन ट्यूमर के लिए प्रभावी चिकित्सकीय दृष्टिकोण खोजने के लिए प्रदान करेंगे. neurosphere परख (एनएसए) अपनी सादगी और reproducibility के कारण अलगाव और इस ट्यूमर कोशिकाओं के कई के प्रसार के लिए पसंद की विधि के रूप में इस्तेमाल किया गया है. इस प्रोटोकॉल neurosphere संस्कृति को अलग करने और शल्य चिकित्सा resected मानव जीबीएम ट्यूमर ऊतक में स्टेम कोशिकाओं की तरह का विस्तार विधि को दर्शाता है. प्रक्रियाओं एक प्रारंभिक रासायनिक पाचन और ट्यूमर के ऊतक के यांत्रिक हदबंदी, और बाद में एनएसए संस्कृति में एकल कक्ष निलंबन परिणामस्वरूप चढ़ाना शामिल हैं. 7-10 दिनों के बाद, 150-2 के प्राथमिक neurospheresव्यास में 00 सुक्ष्ममापी और देखा जा सकता है आगे passaging और विस्तार के लिए तैयार हैं.
सामान्य वयस्क और भ्रूण दिमाग 1, 2, 3, 4 से तंत्रिका स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं को अलग और भी ट्यूमर स्टेम 5 फेफड़े, प्रोस्टेट 6, 7 स्तन और मस्तिष्क 8, 9 के रूप में कैंसर के ऊतकों से कोशिकाओं की तरह neurosphere परख किया गया है अक्सर पसंद की विधि के रूप में इस्तेमाल किया. पूर्व vivo multipotency, आरोपण पर नए ट्यूमर बनाने की क्षमता, और आत्म नवीकरण, यह सरल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परख का प्रयोग, एक resected ट्यूमर ऊतक कोशिकाओं से है कि दैहिक स्टेम कोशिकाओं के रूप में इसी तरह की विशेषताओं को दिखाने का एक अनिश्चित संख्या उत्पन्न कर सकते हैं. इन कोशिकाओं को बुनियादी कैंसर कोशिका जीव विज्ञान सेल करने वाली सेल बातचीत, और भेदभाव, प्रवास, आक्रमण और कोशिका मृत्यु सहित अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, पृथक ट्यूमर स्टेम कोशिकाओं की तरह ट्यूमर के रूप में, प्रगति और पतन भी कैसे और अध्ययन अंतर्निहित पाने सेलुलर तंत्र है कि अंततः चिकित्सकीय अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकता को जानने के लिए एक अमूल्य उपकरण प्रदान करते हैंविकल्प.
The authors have nothing to disclose.
प्रेस्टन ए वेल्स जूनियर केंद्र ब्रेन ट्यूमर थेरेपी के लिए, यह काम फ्लोरिडा ब्रेन ट्यूमर अनुसंधान के लिए केंद्र से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Name of the reagent | Typ | Company | Catalogue number | Comments |
NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
**DNase I | Reagent | Roche | 104159 | |
**Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
No. 10 scalpel blade | Surgical tool | BD | 371610 | |
Petri Dish | Culture ware | BD Falcon | 353003 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050-10 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
* To make HEM, mix 1x10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
** To prepare trypsin inhibitor solution, first make 10 ml of DNase I solution (100 mg DNase dissolved in 100 ml of HEM) and then add 0.14 g of trypsin inhibitor to DNase solution and finally make the volume up to 1 Liter using HEM. Keep aliquots of the final products in -20°C freezer.