Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen
Summary
Ein hoch gereinigte Präparation von Mauslunge dendritischen Zellen beschrieben wird. Besonderer Nachdruck wird auf die Isolierung von konventionellen dendritischen Zellen Teilmenge gegeben.
Abstract
Lung dendritische Zellen (DC) spielen eine fundamentale Rolle in der Sensorik eindringende Krankheitserreger 1,2 sowie in der Kontrolle von tolerogenen Antworten 3 in die Atemwege. Mindestens drei Teilmengen von Lungen-dendritische Zellen in Mäusen beschrieben worden: konventionelle DC (CDC) 4, plasmazytoide DC (pDC) 5 und die IFN-Produktion Killer DC (IKDC) 6,7. Die CDC Subset ist das prominenteste DC Teilmenge in der Lunge 8.
Die gemeinsame Marker bekannt, DC Teilmengen zu identifizieren ist CD11c, eine Typ-I-Transmembran-Integrin (β2), die auch auf Monozyten, Makrophagen, Neutrophilen und einigen B-Zellen 9 ist zum Ausdruck gebracht. In einigen Geweben, mit CD11c als Marker zur Maus DC identifizieren gilt, wie in der Milz, wo die meisten CD11c + Zellen stellen die CDC Subset, das hohe Niveau des Haupthistokompatibilitätskomplex Klasse II (MHC-II) zum Ausdruck bringt. Allerdings ist die Lunge ein heterogenes Gewebe, wo seinSeite DC Teilmengen gibt es einen hohen Prozentsatz von einer deutlichen Zellpopulation, die ein hohes Maß an CD11c drückt Kampf geringe MHC-II. Basierend auf der Charakterisierung und vor allem auf seinen Ausdruck F4/80, eine Milz-Makrophagen-Marker, die CD11c hallo MHC-II lo Lunge Zellpopulation Lungenmakrophagen 10 und in jüngerer Zeit identifiziert worden, wie ein potenzieller DC Vorstufe 11.
Im Gegensatz zu Maus pDC, hat das Studium der spezifischen Rolle der CDC in den pulmonalen Immunantwort wurde durch das Fehlen einer spezifischen Markierung, die in die Isolation dieser Zellen helfen könnte begrenzt. Daher wird in dieser Arbeit beschreiben wir ein Verfahren zu hoch gereinigten Mauslunge cDC isolieren. Die Isolierung der pulmonalen DC Teilmengen stellt ein sehr nützliches Werkzeug, um Einblicke in die Funktion dieser Zellen in Reaktion auf die Erreger respiratorischer Erkrankungen sowie Umwelt-Faktoren, die die Immunantwort des Wirtes in der Lunge auslösen kann gewinnen.
Protocol
Discussion
Isolation der pulmonalen Maus DC ist eine wichtige Technik für die Untersuchung einer breiten Palette von Atemwegs-Reize. Das Verfahren zur Erlangung dieser Zellen enthält kritische Schritte, dass der Verlust von Zellen sowie die Lebensfähigkeit der Zellen und Reinheit zu verhindern. Perfusion der Lunge vor der Abholung wird dazu beitragen, die peripheren Zellen zu eliminieren, sowie verringern Verunreinigungen Erythrozyten. Der Einsatz der automatisierten Dissoziation kann advanteogus werden, wenn eine große Zahl v…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten sich an Marilyn Dietrich an der LSU Durchflusszytometrie Core Facility danken für ihre Hilfe bei der Zellsortierung und Peter Mottram für seine Unterstützung bei der Mikrophotographien. Diese Arbeit wurde von der Flight Attendant Medical Research Institute, die LSU-Competitive Research Program Award und den NIH / NIAID Grants P20 RR020159 und R03AI081171 finanziert.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
Referenzen
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