إجراءات الجرذ<em> في الموقع</em> خصائص العضلات الهيكلية مقلص

1. مقدمة تم المختبر ماكنتوش باستخدام إعداد عضلة الساق الإنسية لعدة سنوات، وقبل ذلك، في إعداد عضلة الساق بأكملها، كما وضعت مع الدكتور فيل غاردينر .. 1 2. خدر وعادة ما تستخدم الكبار سبراغ داولي الفئران (200-300 ز) في المختبر لدراسة خصائص مقلص في الموقع. يمكن تقييد الفئران في جهاز شبكي، وهي متاحة تجاريا، أو من خلال تغطية بمنشفة، وعقد. نستخدم الكيتامين / زيلازين، (100 ملغ · مل -1، لكل منهما) مختلطة في 85:15، وإدارة 0.1 مل لكل 100 غرام من وزن الفئران العضل 2،3. قد بنتوباربيتال الصوديوم (50-60 ملغ · كجم -1، intraperiteneal) أو isoflurane (2-3،5٪، استنشاق) أن تستخدم أيضا 4. في حين أن تأثير مخدر تتخذ، يمكن الحصول على وزن دقيقة وحلق اليسار القائمة الخلفية. هذا هو أيضا تيم حسنه للتأكد من تشغيل جميع الأجهزة الإلكترونية في وجاهزة. وهذا يشمل أجهزة الكمبيوتر، مكبر للصوت قياس الضغط، سخان النفط وغيرها. تحقق من وجود استجابة منعكس عودة دوري وتكملة التخدير حسب الحاجة (0.05 إلى 0.1 مل لكل 100 غرام). 3. بدء جراحة نستخدم منصة زجاج شبكي التي لشل حركة الفئران لعملية جراحية. بسيطة اخفاء الشريط لا وظيفة. تأكد ويمتد هذا الحيوان من hindlimb اليسار لforelimb الحق. إضافة قطرة من زيوت التشحيم للعيون. نستخدم زيت البارافين. خلاف ذلك، سوف تجف العيون مع الكيتامين التخدير. مصباح صغير الجراحية هو مفيد. هذا واحد تنبعث حرارة كافية للمساعدة في الحفاظ على الحيوانات الدافئة. وبدلا من ذلك، يمكن استخدام بطانية تسخين المياه. تحقق للتأكد من ردود الفعل القرنية أو قرصة أخمص القدمين غائبة قبل الشروع. تقنية معقمة ليست ضرورية، لأن هذا الإجراء هو الحادة. سوف الحيوان لا على التعافي من التخدير. نحن الموت ببطء مع الفئران مخدرجرعة زائدة (0.2 مل، داخل القلب) عندما يتم الانتهاء من جميع الإجراءات. شق الأول هو عن طريق الجلد من كعب إلى العمود الفقري. نستخدم مقص، لأنه يمكن التحكم في عمق القطع ويتم استخدام مقص لفصل الجلد عن الأنسجة الأساسية. الفئران لديها تخثر الدم ممتازة، لذلك طالما يمكنك تجنب الأوعية الدموية الكبيرة، وسيقتصر النزيف. إبقاء الأسطح المكشوفة مغطاة بالدماء الشاش المالحة متساوي التوتر، كلما كان ذلك ممكنا. بعد يتم فصل الجلد من النسيج الضام الكامنة، وخفض طبقة العضلات السطحية. تأكد من عدم ذهاب عميق جدا، كنت لا تريد أن تضر العصب الوركي أو الأوعية الدموية، أو العضلات في المصالح. تبدأ خلال عضلة الساق وقطع قريب، وعلى طول خط نفس شق الجلد. تحت نظرة خاطفة لتحديد موقع وتجنب العصب الوركي. بمجرد رؤية العصب، يمكنك اتباع مساره مع شق الخاص بك، ولكن البقاء أعلى بكثير من العصبية. هناك التماس واضحة بين المصحفالجسيمات. تحديد موقع هذا، وقطع على طول خط التماس أن نحو الركبة. مشاهدة لتجنب والأوعية الدموية. 4. إعداد حفرة تجريبية في عظم الفخذ للدبوس العظام قطع طريق طبقة رقيقة من العضلات على الجانب الذيلية من عظم الفخذ، وتعريض العظام العارية. باستخدام أداة باليد الدوارة، الحفر، أو العكس دبوس، (0.9 مم الكربون الصلب بر)، وجعل ثقب تجريبي الصغيرة من خلال القشرة، وفقط في النخاع. لا حفر عميقة جدا، أو النزيف يؤدي و. وسوف تستخدم هذه الحفرة في وقت لاحق لوضع دبوس العظام عظم الفخذ لشل على قاعدة مخطاط العضل. 5. عزل تعصيب من العضلات في الساق الإنسية الخطوة التالية تتطلب المجهر تشريح. تحديد مكان حيث العصب المأبضي يختفي وراء الساق العضلات وسطي. تنتشر بلطف من مختلف الفروع، وقطع كل ما لا يعصب العضلات الإنسية الساق. يمكن تحديد تعصيب من microstimulation. في ثيق المرحلة، أيضا التأكد من يتم قطع الفروع السطحية للعصب الوركي. الواضح الان النسيج الضام بعيدا عن العصب الوركي، بحيث يمكن أن تراجع في الكفة العصبية (لاحقا). تأكد من علاج العصب برفق. يمكن بأي حال من العصبية تؤدي إلى تعذر الاستثارة، وإنهاء تجربتك قبل الأوان. 6. عزل في وتر العرقوب وعضلة الساق ويمكن استخدام تشريح حادة، مع مساعدة عرضية من مقص، لفصل عضلة الساق من الأنسجة الأخرى. يمكن سحب في وتر من الأخمصي من تحت وتر أخيل، وتعادل وقطع. يستخدم مجرد التعادل للمساعدة في اجراء وتر ويمكن خفض بعيدا بعد الحق هو قطع وتر ويتم فصل الأخمصي من عضلة الساق لفترة كبيرة. وضع ربطة حرير رقم 1 حول وتر أخيل، والتعادل في عقدة مربع. لا سحب مسرف، أو سوف تتضرر وتر. نستخدم قراضة العظم لقطع calcan EUS، وترك قطعة صغيرة من العظم لا تزال تعلق على وتر العرقوب. الحفاظ على الأسطح الأفقية قطع للتأكد من قطع العظام، وليس فقط في وتر. وهذا يضمن يمكن اضافته في وتر العرقوب في وقت لاحق إلى مخطاط العضل. على طول الجانب السفلي من الساق، ويمكن أن ينظر إلى النعلية. مرة أخرى، يمكن استخدام تشريح حادة لفصل العضلات النعلية من عضلة الساق. نحن نريد لعزل الساق الإنسية، لذلك فإن العضلات فقط لا تزال تعلق على وتر العرقوب. قطع وتر النعلية، على مقربة من نهاية البعيدة. ثم يمكنك فصل عضلات الساق الإنسية والجانبية، وقطع وتر الجانبي، وترك فقط العضلات الإنسية الساق تعلق على وتر أخيل. سحب العضلات الجانبية بعيدا عن الساق الإنسية، جنبا إلى جنب نحو 50٪ من طوله. بعد هذه المدة، والألياف تتقاطع والضرر سوف تنجم عن سحب أخرى. تحقق للتأكد من أن العضلات هي خالية من النسيج الضام. ه "> 7. قطع الساق وضع رباط حول ساق، فوق نقطة الوسط. هذا يجب أن يكون ضيق، ودون قطع في الأنسجة. حلقة ثانية قبل ربط يساعد على منع الانزلاق. استخدام مرة أخرى عقدة مربع لتأمين. باستخدام منشار صغير، وقطع الجزء الأسفل من الساق بعيدا. يجب أن يكون هذا الخفض في حوالي منتصف المسافة على طول الساق. إدراج التحقيق حادة في النخاع من الساق. وسوف تستخدم هذه مسبار لشل حركة الساق على قاعدة مخطاط العضل. 2 إرفاق الأشرطة المطاطية للجلد، وذلك باستخدام مقاطع ميشيل. وسوف تستخدم هذه الأشرطة المطاطية وإضافية لعقد الجلد في كل أنحاء العضلات لتشكيل الحاوية التي سوف تكون مليئة حرارة زيت البارافين. [اختياري] 8. إدراج بلورات sonometric (خطوة اختيارية) 5 وضع الحيوان على وسادة التدفئة في إعداد منخفض. A التحقيق المستقيم، ويمكن إذا لم يتم إدخال بالفعل إدراجها في هذا الوقت. استخدام قطرة صغيرة من زيت البارافين لتليين. باستخدام microstimulation، وتحديد الغايات من الكراسة داخل العضلات. كزة إبرة قياس 21 إلى الموقع المنشأ على حد سواء والإدراج في العضلات. حرك بلورة sonometric في الحفرة التي أدلى بها الإبرة، وختم الطبيب البيطري مع سندات الغراء الجراحية. استخدام قطرة صغيرة جدا من الغراء؛ التأكد من أن يتم وضعها اليمنى على الكريستال. تطبيق الغراء على قطعة من قطع الورق مع زاوية حادة يساعد في تطبيق الغراء بدقة. نحن وضع واحد الكريستال إضافية على الإدراج من الكراسة التي تم تحديدها من قبل microstimulation. [متابعة] 9. تحميل في جهاز (انظر الشكل 1) وضع الفئران على قاعدة مخطاط العضل، مع التحقيق الظنبوب موجهة نحو ذراع. وضع مسبار في حامل، لشل حركة الساق. شد الجلد حتى في الجانبين، لتشكيل وعاء وتأمين الأشرطة المطاطية مع. تعيين بت الحفر (بوصة 1/16 ال) في عظم الفخذ، وذلك باستخدام الطيارحفرة التي تم إنشاؤها أثناء إعداد الجراحية. تأكد من أنك قد دعم عظم الفخذ على الجزء الأمامي كما قمت بوضع مثقاب (نائب في دبوس) وكسر عظمة الفخذ ينتج، إنهاء التجربة قبل الأوان. نائب يضعوا دبوس إلى شريط عرضي لمنع حركة عظمة الفخذ. وضع الجذع الأعلى من العصب الوركي من خلال تحفيز العصب صفعة لل(الكاثود نحو العضلات) والثنية وثيقة عودة إلى أصل العضلات. توصيل مشجعا لهذه الأسلاك. إرفاق وتر العرقوب إلى رافعة، التي لديها أجهزة الاستشعار قياس الضغط عليه. ربط سنججلي، ولكن ترك بعض المجال للتعديل في وقت لاحق. تأكد من أن المواءمة بين العضلات هو عمودي مع ذراع. ملء الحاويات التي شكلتها الجلد مع زيت البارافين حرارة. بدوره على مصباح الحرارة والدروع المصنوعة من موقف البربون فوق رأس الحيوان، ومحول القوة. قد تكون دروع احباط إضافية اللازمة لضمان درجة حرارة الأساسية للحيوان لا exce38 ° C. إد ويمكن تعديل طول العضلات حتى تتم إزالة الركود في سلسلة من الاتصال بين الساق الإنسية ومحول القوة. 10. تعيين الجهد القصوى وطول المرجعية بينما هو في العضلات الاحماء، إعداد المنبه واختبار الجهد التحفيز. من المهم للتأكد من تعيين التحفيز في مدة قصيرة جدا نبض. نحن استخدام 50 ميكرو ثانية. يجب أن يكون الجهد القصوى أقل من 1 V. ابتداء عند 0.5 V، زيادة الجهد حتى نشل السعة لا تزيد. الجهد القصوى أقل الجهد الذي ينشط جميع الوحدات الحركية. ونحن عادة في تحفيز الجهد ضعف الحد الأقصى، أو 3 V أيهما أعلى. عادة، سوف تبدأ التجارب في العضلات طول الانكماش الذي يعطي أكبر نشل. يتم الحصول على نشل مع نبض محفزة واحد. يتم زيادة طول العضلات التي كتبها مم 1 معلومات عن لنشل آخر. ويتكرر هذا طالما السعة نشلآخذ في الازدياد. مرة واحدة نشل انخفاض السعة، سيتم إرجاع طول لتلك التي أعطت نشل أكبر سعة. بعد هذا الإعداد الأولي من طول، ونحن اختبار النظام مع ما نشير إليه بأنه "انكماش تكييف تكززي". تم تعيين مشجعا لتقديم البقول في 200 هرتز لمدة 500 مللي ثانية. وتقديم هذا التحفيز يؤدي إلى تقلص تكززي لتنصهر تماما. فإن القوة المتولدة من العضلات تشديد كافة الاتصالات، بما في ذلك عقدة على العضلات. بعد فترة راحة مناسبة لتبديد التقوية 4، وطول العضلات المرجعية لتتم إعادة تعيين (انظر الجزء 9.2). عادة، تقلص تكززي تكييف وسمحت بعض تقصير طول الكراسة، وبالتالي فإن العضلات تضطر إلى أن تمتد قليلا لنعود إلى طول تعطي نشل أكبر انكماش السعة. 11. بدء التجربة وتجربة نموذجية تشمل adjustm طولالأنف والحنجرة و / أو التحفيز مع مجموعة متنوعة من أنماط التحفيز. قد تنطوي على جمع البيانات فقط القوة، أو قوة، مع طول، وطول كراسة ومخطط كهربية العضل. [اختياري] 12. قوة العلاقة التردد 2 ضبط مدة طويلة بما فيه الكفاية القطار لتصل إلى هضبة القوة في أي تردد في المصالح. وتبلغ أقصى قوة في العضلات ومتساوي القياس الساق الإنسية في 200 هرتز. يجب أن تكون مدة تدريب لا يقل عن 200 مللي؛ أطول أفضل للترددات منخفضة نسبيا، ولكن سوف يؤدي في بعض التعب في حالة استخدام تقلصات عديدة لتحديد النطاق الكامل للعلاقة قوة التردد. ونحن عادة استخدام تقلصات في 0، 20، 40، 60، 100، 80 هرتز و200. وهذا النطاق من الترددات تسمح وصف مجموعة كاملة من العلاقة قوة التردد. يجب أن يسمح للراحة مناسبة بين الانقباضات لتجنب التعب (1-10 دقائق). 13. قوة طول relationshبى 6 مع طول يقدر ب الأمثل المحددة سابقا، يمكن تحديد علاقة القوة بشكل منهجي من خلال تعديل طول طول العضلات من -4 مم إلى +4 مم باستخدام جهاز مضاعفات السيارات. وينبغي أن يتم ذلك باستخدام التحفيز القصوى (200 هرتز)، ولكن وجدنا أن تقلصات وجيزة جدا وسوف تعطي نفس طول الأمثل صحيح 7. تقلصات Submaximal، مثل تشنجات، ويمكن استخدام، ولكن هذا سوف تسفر عن طول مختلفة في الاعتماد القوة 8. جانبا هاما من تحديد قوة العلاقة طول هو الحاجة إلى تقدير قوة سلبية في طول كراسة الذي يحدث قياس القوة. ويتم احتساب قوة فاعلة على أساس الفرق بين إجمالي القوة والقوة المناسبة السلبي. منذ هياكل موازية مرنة تتحمل قوة سلبية وهذه هي سلسلة في سلسلة مع الهياكل المرنة، ويجب على مساهمة القوة السلبي لانخفاض إجمالي قوة كما العلا سلسلةوامتدت الهياكل ستيك خلال الانكماش 3. مرة واحدة ومن المعروف أن قوة سلبية لجميع أطوال العضلات ذات الصلة، يمكن تقدير قوة مناسبة السلبي مع القياس المستمر للطول كراسة باستخدام sonomicrometry، أو عن طريق تقدير الامتثال لنظام القياس والهياكل في سلسلة من وحدة وتر العضلات. إذا لم يتم ذلك، والتقليل من طول الأمثل للقوات إعداد والذروة. 14. قوة العلاقة السرعة 9 إذا كنت ترغب في تحديد العلاقة قوة السرعة، وسوف تحتاج إلى إرفاق محولات القوة لهذا النظام، الذي يسمح السيطرة على إما تحميل أو معدل التغير طول. الأسلوب الأسهل والأكثر فعالية من حيث التكلفة لاستخدام ضغط الهواء لتقييد تقصير لتحميل الخاضعة للرقابة. في نظامنا، يتم إرفاق العضلات لذراع على جانب واحد من نقطة ارتكاز وضغط الهواء يعوق التغيير على طول الجانب الآخر. جهاز استشعار طول شمال شرقلاستخدامها محرران بحيث كنت قادرا على الكشف عن التغيير في طول العضلات خلال تقلصات متساوي التوتر. هذا الترتيب يسمح تقلصات تلوي التحميل مع المقاومة الهوائية. يمكن خزانات مزدوجة تسمح تقلص متساوي القياس مع إطلاق لتحميل متساوي التوتر. وينبغي الحصول على ما مجموعه تقلصات 15-20، مع حمولة تتراوح من تفريغ تقريبا لقوة متساوي القياس الحد الأقصى. عندما تركيب البيانات إلى المعادلة، يجب أن يحمل أكثر من 90٪ من متساوي القياس لا يمكن استخدامها 9. 15. ممثل النتائج: يتم عرض عينة تقلصات في الشكل 2. تم الحصول على هذه الانقباضات لتوضيح العلاقة قوة التردد. حساب القوة الذروة النشطة لهذه التقلصات، والتآمر قوة فعالة ضد تردد، والمحاصيل الشكل 3، والعلاقة قوة التردد. يمكن احتواء البيانات المعروضة في الشكل 2 إلى المعادلة: = AF ج / (1 + ه ((AF) / ب) + د)؛ AF هو قوة فاعلة، F هو التردد و، وهو ب، ج، د ثوابت. لالعضلة الفئران الإنسي، وتواتر نصف القصوى من التحفيز هو عادة 50-60 هرتز في غير أنهكتهم العضلات 2. سوف تناسب النتائج ارتباطا وثيقا خط المعادلة التي وصفها أعلاه. الشكل 1 أجهزة والعضلات انشاء: هوائي يتم عرض مجموعة المتابعة على اليسار، متساوي القياس على اليمين. ويرد النظام رافعة تظهر على اليسار لجدول ترجمة عندما يتم المطلوب تقلصات الحيوي (مقتبسة من 13). يتم التحكم في المحركات السائر من قبل كمبيوتر (مقتبسة من 14). الشكل 2 تقلصات متساوي القياس متراكبة 20، 40، 60، 80، 100 و 200 هرتز. اتساع الانكماش هرتز 200 هو 8،13 N. les/ftp_upload/3167/3167fig3.jpg "/> يتم رسم بالموقع قوة من تقلصات في الشكل 2 والخط يمثل خط الأنسب: الشكل 3 قوة التردد العلاقة.