Mecanismos Herbívoro caracterizando Resistance: Spittlebugs em Brachiaria Spp. como Exemplo

1. Plantas Estacas única a partir de plantas adultas são utilizadas como unidades experimentais. As estacas são cortadas a 10 cm para garantir a uniformidade do material de plantio. Para evitar a contaminação por patógenos de plantas, os cortes são lavados em uma solução de hipoclorito de sódio a 3% para 2 min e depois enxaguados com água da torneira thoughroughly. Cada corte é plantada em ca. 36 g de solo estéril em um tubo de PVC cilíndricos (5,3 centímetros de diâmetro externo de 6,5 cm de altura) selado na extremidade inferior com uma taça de isopor e revestido por uma bucha de PVC. O corte é mantida no lugar por um anel de espuma colocada na abertura central da bucha. Plantas são fertilizadas e regado conforme necessário para manter a umidade do solo adequada. Plantas vão crescer durante um mês antes de ser desafiado por insetos, permitindo o desenvolvimento de raízes superficiais, que servem como locais para alimentação das ninfas-raiz xilema alimentação cigarrinha. Tubos de PVC com estacas enraizadas são invertidos para 8 d antes de infestação para estimular ainda mais o crescimento de raízes superficiais, parcialmente o ajuste para diferenças inerentes na arquitetura de raiz. Esta etapa requer uma fonte de luz artificial, que prevê 24 dias ha. Para evitar confusão escapa da herbivoria com resistência herbívoro, planta individual repetições, com pouca ou nenhuma raiz superficial após este tratamento inversão são eliminados do experimento. Esta eliminação deve ser freqüente, nunca levando à eliminação do genótipo que eles representam. 2. Insetos Cigarrinhas adultas são coletados a partir do campo, identificou a espécie, e introduziu a gaiolas de oviposição onde são prestados folhagem de brachiariagrasses suscetíveis para se alimentar. As fêmeas colocam seus ovos no solo contidos em uma bandeja rasa removíveis colocados no fundo das gaiolas. Depois de vários dias, o solo está em suspensão na água e passou por uma série de peneiras (42, 60 e 150 mesh) para coletar os ovos. Suspendendo o material peneirado em uma solução salina 30% faz com que os ovos maduros para flutuar, deixando para trás os ovos imaturos e qualquer matéria orgânica residual. Para evitar a contaminação por patógenos de insetos, ovos são desinfetados com uma solução de hipoclorito de sódio 0,5% por 5 min e depois enxaguados com água destilada. Cada planta-teste (unidade experimental) está infestada na superfície do solo com seis óvulos maduros. Apenas óvulos maduros perto de incubação são selecionados para infestações. Eles podem ser identificados pela presença de dois pontos vermelhos em sua parte anterior, correspondente aos olhos do inseto; marcas-de-rosa em sua parte posterior, correspondente ao abdômen do inseto, e um opérculo totalmente expandida. Incubação de sucesso é confirmado 4 d tarde, altura em que qualquer ovo unhatched é substituído por um recém-nascido cigarrinha da nossa colônia. Plantas de teste são dispostos em um delineamento em blocos casualizados com seis repetições por genótipo. 3. Avaliações O experimento é avaliada ca. 30 d após a infestação (horários exatos variam dependendo da espécie de inseto estudada). Dano é pontuados em uma escala 1-5 visual, onde 1 corresponde a nenhum dano visível e 5 corresponde a uma planta morta (Figura 1). Pontuação danos às plantas fornece uma estimativa da tolerância. Figura escala Danos 1. Utilizado para avaliar a tolerância a cigarrinha herbivoria em Brachiaria spp. 1 = nenhum dano detectável; 2 = folhagem 0-25% de necrose; 3 = folhas 25-50% de necrose; 4 = folhas 50-75% de necrose; 5 = folhagem 75-100% de necrose. Sobrevivência do inseto é avaliada através da contagem de insetos atingindo tanto instar seu final ou fase adulta (Figura 2). De pontuação para a sobrevivência do inseto fornece uma estimativa da antibiose. Figura 2. Cigarrinha desenvolvimento de primeiro ínstar (esquerda) para adultos (direita). Insetos só chegar, pelo menos, instar os seus finais (setas) na data da avaliação são contadas como "sobreviventes". 4. Resultados representativos Resultados de um ensaio de híbridos representante Brachiaria triagem para resistência à cigarrinha Aeneolamia reducta são apresentados na Figura 3. Figura 3. Resultados da triagem híbridos de Brachiaria para resistência à cigarrinha Aeneolamia reducta. Consideramos plantas resistentes, se sua resposta à herbivoria cai na metade inferior desta trama. Antibiose aumenta da direita para a esquerda e para a tolerância aumenta de cima para baixo. As setas apontam no nosso cheques resistente.