Charakterisierung Herbivore Resistenzmechanismen: Spittlebugs auf Brachiaria Spp. als Beispiel

1. Pflanzen Einzel-Stecklinge aus reifen Pflanzen sind als experimentelle Einheiten verwendet. Die Stecklinge werden bis 10 cm geschnitten, um die Einheitlichkeit der Pflanzmaterial gewährleisten. Um zu verhindern, Kontamination durch Pflanzenpathogene werden die Stecklinge in eine 3% ige Natriumhypochlorit-Lösung für 2 min gewaschen und dann thoughroughly mit Leitungswasser gespült. Jeder Schnitt ist in ca. gepflanzt. 36 g sterilem Boden in einem zylindrischen PVC-Rohr (5,3 cm Außendurchmesser von 6,5 cm Höhe) am unteren Ende mit einem Styropor-Becher versiegelt und verschlossen mit einem PVC-Buchse. Das Schneiden wird an Stelle von einem Schaumstoff-Ring in die zentrale Öffnung der Büchse platziert statt. Die Pflanzen werden gedüngt und bewässert wie notwendig, um ausreichende Bodenfeuchte zu erhalten. Die Pflanzen werden für einen Monat, bevor sie von Insekten in Frage gestellt werden, so dass die Entwicklung von oberflächlichen Wurzeln, die als Futterplätze für das Root-Xylem-Fütterung spittlebug Nymphen dienen. PVC Rohre mit Stecklinge sind für 8 d vor Befall weiter stimulieren das Wachstum der oberflächlichen Wurzeln, teilweise bereinigt um angeborene Unterschiede in root Architektur invertiert. Dieser Schritt erfordert eine künstliche Lichtquelle, die wir für 24 Stunden am Tag. Zur Vermeidung von Verwechslung entkommt Herbivorie mit Pflanzenfresser Widerstand, repliziert einzelne Pflanze mit wenigen oder keinen oberflächlichen Wurzeln nach dieser Umkehrung der Behandlung aus dem Experiment werden eliminiert. Diese Eliminierung sollte selten, nie, die zur Beseitigung der Genotyp die sie vertreten. 2. Insekten Adult spittlebugs sind aus dem Bereich gesammelt, identifiziert werden, um Arten und eingeführt, um die Eiablage Käfigen, wo sie Laub empfänglicher brachiariagrasses bereitgestellt werden, um sich ernähren. Die Weibchen legen ihre Eier im Boden in einer flachen abnehmbaren Tablett auf dem Boden der Käfige gebracht werden, enthalten. Nach einigen Tagen wird der Boden in Wasser suspendiert und durch eine Reihe von Sieben (42, 60 und 150 mesh), um die Eier zu sammeln. Aussetzung der gesiebte Material in eine 30% ige Kochsalzlösung bewirkt, dass die reifen Eizellen zu schweben, und hinterließ unreife Eier und restliche organische Substanz. Um zu verhindern, Verunreinigungen durch Insekten Krankheitserreger, sind Eier in eine 0,5% ige Natriumhypochlorit-Lösung für 5 min desinfiziert und dann mit destilliertem Wasser gespült. Jeder Test-Anlage (experimentelle Einheit) befallen ist an der Bodenoberfläche mit sechs reife Eier. Nur reife Eier in der Nähe von dem Schlüpfen sind für parasitäre Erkrankungen ausgewählt. Rosa Markierungen im hinteren Teil, entsprechend der Insekten Bauch; und eine voll ausgebaut Operculum Sie können durch die Anwesenheit von zwei roten Punkte in ihrem vorderen Teil, entsprechend dem Insekt die Augen identifiziert werden. Erfolgreiche Brut wird 4 d später bestätigte an welcher Stelle alle unhatched Ei von einem Neugeborenen spittlebug aus unserer Kolonie ersetzt wird. Testpflanzen werden in einer randomisierten vollständigen Block-Design mit sechs Wiederholungen pro Genotyp angeordnet. 3. Auswertungen Das Experiment ist ca ausgewertet. 30 d nach dem Befall (genaue Zeiten variieren je nach Insektenart studiert). Der Schaden wird auf 1 bis 5 visuellen Skala, wobei 1 entspricht keine sichtbaren Schäden und 5 entspricht einem abgestorbenen Pflanzenteilen (Abbildung 1) erzielt. Scoring-Anlage Schaden liefert eine Schätzung der Toleranz. Abbildung 1. Damage-Skala zur Toleranz gegenüber spittlebug Herbivorie in Brachiaria spp. 1 = keine nachweisbaren Schaden, 2 = 0-25% nekrotische Laub, 3 = 25-50% nekrotische Blätter, 4 = 50-75% nekrotische Laub, 5 = 75-100% nekrotische Laub. Insect Überleben wird durch Zählen der Insekten zu erreichen entweder ihre endgültige Erscheinungsform oder erwachsenen Stadium (Abbildung 2) bewertet. Scoring für Insekten das Überleben ermöglicht eine Schätzung der Antibiose. Abbildung 2. Spittlebug Entwicklung von der ersten Larvenstadium (links) bis zur Erwachsenenbildung (rechts). Nur Insekten Erreichen zumindest ihre letzten Larvenstadium (Pfeile) zum Zeitpunkt der Evaluierung werden als gezählt "Überlebenden". 4. Repräsentative Ergebnisse Ergebnisse einer repräsentativen Test-Screening Brachiaria Hybriden zum Widerstand gegen die spittlebug Aeneolamia reducta sind in Abbildung 3 dargestellt. Abbildung 3. Ergebnisse von Screening Brachiaria Hybriden für die Resistenz gegen spittlebug Aeneolamia reducta. Wir betrachten Pflanzen resistent, wenn ihre Antwort auf Herbivorie fällt in der unteren Hälfte dieses Grundstück. Antibiose steigt von rechts nach links und Toleranz erhöht sich von oben nach unten. Die Pfeile zeigen an unserem beständig überprüft.