리어링을위한 최적화된 프로토콜 Fopius arisanus Tephritid 과일 Parasitoid 난다
Summary
Fopius arisanus 성공적으로 이러한 중요한 열대 해충의 생물 학적 제어에 사용되는 Tephritid 과일 파리의 달걀 애벌레 parasitoid입니다. 우리는 여기서 F.을 양육을위한 최적화된 프로토콜을 설명 쉽게 사용 가능한 재료를 사용하여 작은 규모 arisanus.
Abstract
Fopius arisanus (소난)는 적어도 두 가지 이유 때문에 Tephritid 과일 파리의 중요한 parasitoid입니다. 첫째, 그것은 계란 1 단계 동안 호스트를 감염하는 것으로 알려져 단지 세 opiine의 parasitoids의 하나입니다. 둘째, 그것은 잠재적인 과일 비행 호스트 다양한 있습니다. 그 삶의 역사, F.으로 아마도 인해 arisanus가 성공적으로 여러 열대 지역 2-4 과일 파리의 생물 학적 제어에 사용되고 있습니다. F.의 넓은 사용하는 하나의 장애 과일 비행 제어를위한 arisanus는 안정적인 실험실 식민지 5-9를 구축하기 어려운 것입니다. 이러한 어려움에도 불구하고, 1990 년대 USDA 연구원에서 F.의 실험실 인구를 유지하기 위해 신뢰할 수있는 방법을 개발 arisanus 10-12. F.에 상당한 관심이있다 arisanus 생물학 13,14, 특히 Tephritid 호스트의 다양한 14-17를 식민지하기 위해 능력에 대한, 관심은 특히 지난 10 년 18 새로운 대륙에 Bactrocera 과일 파리 해충의 놀라운 확산에 의해 구동됩니다. F.에 대한 자세한 연구 arisanus 및 생물 학적 제어 에이전트로이 종류의 추가 배치는 양육 방법의 최적화 및 개선 도움이 될 것입니다. 이 프로토콜 및 관련 비디오 문서에서 우리는 F.를 양육을위한 최적화된 방법을 설명 arisanus는 이전에 설명한 방법을 기반으로 12. 우리가 여기서 설명하는 방법은 있습니다 F.의 양육 전세계와 상대적으로 낮은 수동 노동 요구 열대 지역에서 사용할 수있는 재료를 사용하여 과일의 사용없이 작은 규모 arisanus.
Protocol
1. parasitization에 대한 호스트 과일 플라이 달걀을 준비 가득한 요리, 측면 당 길이는 10cm와 1.5 cm 깊이, 한천을 (보다 비용 효율적인 옵션 또는 Gelcarin GP812, FMC 생체 고분자, 유잉 NJ)가 준비하여 parasitized하는 과일 플라이 달걀의 기판을 준비합니다. 물의 리터 당 9g의 농도에 한천을 준비합니다. 액체 배지 (약 70ml)로 가장자리에 요리를 입력하고 (최소한 45 분) 그들이 냉각 및 응고 수 있습니다. 한천 블록은 탄탄한되면, 각 블록의 상단을 덮고, 티슈의 단일 계층 (조지아 퍼시픽 '환경 설정'배치 조직의 단일 가닥)을 적용합니다. 조직 때문에 표면 수분의 한천 쉽게 붙어해야합니다. 한천 블록의 조직 대상 표면에 물이 정지 0.5 ML 볼륨 과일 플라이 달걀을 적용합니다. 우리 insectary에서는이 Bactrocera 발등 (ML 당 12,000 계란)의 6000에 대한 알을 동일합니다. 넓은 브러시는 조직 표면 균일 과일 플라이 달걀을 확산하기 위해 물에 담근 깨끗한 2.5 cm를 사용하십시오. 산란을 허용하도록 parasitoid 연습장의 하단 화면에서 과일 파리 계란을 넣으십시오. 계란을 방해 수도 죽은 기생충을 제거하기 위해 하단 화면의 아래쪽을 누릅니다. 아래 화면은 계란을 만지지 않는 경우 그게 최선입니다. 기생충은 야간과 다음날에 약 21 시간 알을 낳다 수 있습니다. 이것은 parasitized하는 계란의 높은 비율을위한 충분한 시간이다. 긴 노출 위험의 superparasitization. 2. parasitized 호스트 과일 해칭 및 pupation 난다 상승에 직면하고 계란과 과일 비행 다이어트 19 1.25 리터 당 parasitized 알을 3-3.5 준비 한천 블록을 배치하여 용기를 양육 준비합니다. 큰 pupation 컨테이너에 좋은 성적 vermiculite이나 씻어 모래 1.5 cm 깊이 레이어를 통해 라이저에 계란과 다이어트 컨테이너를 놓습니다. 와 마스킹 테이프의 가장자리 뚜껑과 테이프로 pupation 컨테이너를 커버. Vermiculite는 (아래 참조) 선별 후 재사 용할 수 있습니다. 과일 플라이 아웃 크롤 링 애벌레 아래 vemiculite로 20 '팝'에 대한 다이어트 컨테이너의 상단과 pupation 컨테이너 뚜껑 사이에 충분한 공간이 있는지 확인하십시오. 27 방에 pupation 컨테이너를 이동 ° C 그리고 1 주일간 80 %의 상대 습도 (RH). 첫 4 일 동안 어두운 천으로 커버 용기 그러면 남은 일 동안 천을 제거합니다. 일주일 뒤에 애벌레 다이어트 제거되면 애벌레는 쫌 및 pupation에 대한 vermiculite을 입력했습니다. vermiculite의 애벌레가있다면, 그들이 하룻밤 사이에 번데기가되다 수 있습니다. 체 vermiculite에서 pupae. 굵은 체 (약 3mm)로 시작 다음 vermiculite의 나머지 대단히 짧은 시간을 제거하는 손 체를 사용합니다. 3. 정렬 및 선택 번데기가 포함된 F. arisanus는 부분적으로 크기 unparasitized 과일 파리에서 시위 수 있습니다. 이들은 parasitized 파리에 대해 풍부하게되므로, 직경 1.65와 2.26 mm 사이에 번데기를 수집합니다. 대부분 소형 parasitoids를 포함, 큰 번데기는 주로 파리를 포함하는 작은 12 번데기가. parasitized pupae에 대한 여성의 비율의 크기가 12 적극적으로 상호 그것도 있습니다. 방법 다양한 크기 pupae를 정렬하는 고용 수 있습니다. 우리는 사용자 정의 크기 분류기 21을 사용하여 기계적인 방법을 설명합니다. 서서히 크기 분류기 피드 진동 피더 상단의 깔때기에 pupae를 배치합니다. 30 °의 각도로 약간 분기하는 압연 바의 쌍 구성되어 크기 분류기로 pupae 먹이. 깔때기를 통해 열 별도의 용기에 비어있는 슬롯의 배열에 크기에 따라 개별적으로 pupae 놓습니다. 1.65의 크기 범위에있는 컵에서 2.26 mm까지 pupae를 수집하고 대부분의 파리 unparasitized pupae에서 부상까지 7 일 동안 더 출현 케이지에 넣습니다. 다음, 저 아직 포함 곤충에서 빈 번데기를 구분하기 위해 부채를 사용합니다. 4. F. arisanus의 출현 및 유지 보수 F.의 식민지를 유지하기 위해 arisanus 약 25cm 쪽 당 길이, 이동식 유리 앞에 함께 parasitoid 들고 케이지를 사용합니다. 케이지는 양쪽의 위쪽과 두 1mm이 검사를하고 있습니다. 새장 뒷면은 액세스 9cm 구멍이있는 고무 시트에 덮여 있습니다. 새장 바닥 밖 parasitoid 산란을위한 과일 플라이 달걀 두 개의 한천 블록의 배치를 허용하는 충분히 큰 1~2mm이 화면 내부에 적용 상처가 있습니다. 보관 케이지는 또한 고가 사망률의 결과로, 새장 앞 따라 parasitoid 크롤 링을 만들 수 있습니다 조명을 최소화하기 위해 유리 전면의 하단 분기 따라 적용된 부분이 있어야합니다. 이러한 selec 약 11g을 플레이스지름 플라스틱 용기에 테드 pupae 약 9cm. 이것은 케이지 당 600-700에 대한 기생충을 생산해야합니다. 크기 선택 약 60 %의 여성에서 발생한다. 용기 검사 뚜껑을 첨부합니다. 뚜껑은 성인 F. 수 2mm이 상영으로 덮여 있어야 출현시 컨테이너를 떠나 arsianus 있지만, 남아있는 과일 파리가 포함됩니다. 24 기생충을 유지 ° C와 12시 12분 photoperiod 좋은 환기와 RH 45 %. 높은 사망률이 관찰되면, 몇 시간이나 증가 통풍을위한 옥외 새장을 이동하면 그것을 줄일 수 있습니다. 기생충 하나 추가 일주일에 알을 낳다 준비되어야하며 두 개 더 주 생산해야합니다. 줄무늬가 연습장 상단의 주당 또는 언제든지 사용할 수있는 벌꿀은 건조 적어도 세 번 부른 꿀을 undiluted. 손가락을 사용하여 좁은 줄무늬에 늘인 벌꿀을 적용합니다. 줄무늬가 너무 무거운 경우에는 벌꿀이 케이지에 똑 않습니다, 너무 밝은 경우, 벌꿀 신속하게 밖으로 건조하고 자주 reapplication가 필요합니다. 기생충에 습기를 제공하기 위해, 새장의 꼭대기에 자리 한천 블록 (10cm X 10cm X 4cm). 이들은 두 번 주당 변경해야합니다. 5. 대표 결과 : 우리는 여기서 USDA – ARS F. 실시 품질 관리 절차의 결과를보고 1월 5일 및 2010년 6월 22일 사이 힐로, 하와이에서 arisanus 양육 작업. 이 동영상이 문서 및 프로토콜에 설명되어있는 규모의 힐로 위치에 리어링 8 월 2009 년 시작되었고, 새로운 위치를 초기 문제와 조정은 대부분 1 월 해결했다. 따라서 이러한 데이터는 다른 연구자가 설명한대로 그들이 프로토콜을 따르는 경우 자신의 식민지를 시작 얻을 수있는 결과의 대표이며, 일반적으로 경험 양육 곤충 있습니다. 이 기간 동안 우리는 F.의 작은 식민지를 유지했다 arisanus : 3,600 대해 F.에 해당하는 주당 생산 4 parasitoid 잡고 케이지, arisanus. 농축 parasitization 요금의 초기 검사는 1.65의 크기 범위에서 pupae의 2g 샘플을 복용에 의해 실시되었다 – 2.26 mm (농축)을 들고 새장에 개발의 추가 주 (전에 애벌레 다이어트가 제거 즉시 IE와 pupae는 걸러서와 크기가 정렬. 우리는) '초기 pupae'와 같은 이들을 참조하십시오. 2010 년 첫 3 달 동안 풍부한 샘플의 평균 비율의 기생충은 0.46 (SD = 0.18가)되었습니다. 다음 분기 동안이 의미는 새로운 위치에있는 식민지와 양육 절차의 안정화를 반영, 0.58 (SD = 0.08가)되었습니다. 성공적으로 parasitized하지 않은 농축 pupae가 emergents을 생산 안되는 그 파리를 생산 이들을 포함합니다. 빈 번데기의 개최 케이지 제거에 추가 주 후에 다른 이g 샘플 ( '늦은 pupae') 촬영했습니다. 과일 파리는이 두 번째 예제의 1 % 미만 표현. 과일 파리의 낮은 비율은 이전 기생충에 비해 파리의 출현 때문에 보관 용기에 남아 가장 야구를하기 위해 부분적으로 때문입니다. 마지막으로, 그림 1 준 2010 년 월부터 pupal 대량의 수율을 제공합니다. 수확량은 관심의 크기 범위에서 pupae 강화, 1.65-2.26 mm에서 측정됩니다. 조정이 새로운 시설로 만들어진 동안 일년의 시작 부분에있는 '초기 pupae'의 큰 질량은 과일 파리의 비율이 높다고 그 시간에 unemerged pupae을 나타냅니다. 그림 1. 초기 농축 (pupal 직경 1.65 – 2.26mm)의 항복 (즉시 크기를 선택 후)와 힐로, 하와이에서 ARS – USDA F. ariasnus 콜로니에서 '늦은'(한 주 동안 보관하고 빈 탄피를 제거 후) pupae , 2010년 1월에서 6월까지
Discussion
이 프로토콜과 함께 동영상이 문서에서는 F.를 양육을위한 최적화된 프로토콜을 설명하고 증명하고있다 ariasnus, 실험실 환경에서 Tephritid 과일 파리의 parasitoid. 이 프로토콜은 식민지를 유지하는 데 필요한 노동과 전문 장비의 양을 최소화하기 위해 몇 년 동안 정제되었습니다. 우리는 호스트 과일 파리가 잘 설립, 생산하고 안정적인 식민지가 양육 parasitoids에서 시도를 위해 필요합니다. 우리 insectary 우리는 호스트 과일 플라이로 Bactrocera 발등을 사용하지만 다른 종뿐만 아니라 14-17 관할 호스트로 표시되었습니다.
F. 여러 측면 arisanus 콜로니 유지 보수 탐험으로 남아 있습니다. 이들은이 수종 10 실험실 적응의 속도, 22 학습의 메카니즘과 적응 및 호스트 과일 플라이의 소성에 관여있을 수 있습니다 메커니즘 발생할 수있는 유전자 변화를 포함합니다.
폴리네시아, B.에 B. 발등 : 지난 10 년 동안 특히 전세계 Dacine의 파리의 확산의 여러 예제 속 Bactrocera 이들하려고 애썼던 남미, B.의 일부에 carambolae 아프리카와 B.에 invadens 아프리카 북부 지중해. 3,23,18 테스트 같은 F.과 같은 생물 학적 제어 에이전트의 효율성에 zonata 다른 Bactrocera 종에 대한 arisanus은 높은 우선순위되어야하고,이 프로토콜과 함께 비디오 문서에서 설명하는 방법의 응용 프로그램 F. 연구를 가속화할 것입니다 우리의 희망입니다 위치 24보다 다양한 arisanus. 마지막으로, 기점으로이 방법을 사용하여 추가 조사는 또한 소설 달걀 parasitoids의 식민지 25,1에 중요한 정보를 제공할 수 있습니다
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 컴퓨터 그래픽 도움 insectary와 나타샤 Sostrom에 도움 키스 Shigeteni 감사합니다. 이 작품은 USDA – ARS에 의해 투자되었다. 본 출판물에 표현 의견, 결과, 결론이나 권고는 저자의 견해이며, 반드시 USDA의 의견을 반영하지 않습니다. USDA는 동등한 기회 제공 및 고용주입니다.
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Diesen Artikel zitieren
Manoukis, N., Geib, S., Seo, D., McKenney, M., Vargas, R., Jang, E. An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies. J. Vis. Exp. (53), e2901, doi:10.3791/2901 (2011).