使用温和的亲和力,以监测生物系统的结合热力学等温滴定量热的一个协议。
等温滴定量热(ITC)是一个有用的工具,为了解一项具有约束力的反应的完整的热力学图片。在生物科学,大分子的相互作用是理解细胞的机制至关重要。实验条件,如缓冲区和温度,可以根据特定约束力的制度,正在研究。然而,细心的规划是必要的,因为某些配体和高分子浓度范围是必要的,以获取有用的数据。大分子与配体的浓度要准确可靠的结果,决定。护理也需要准备样品的杂质可以显著影响的实验时,应采取的。当ITC的实验与对照,正确执行的,有用的绑定信息,如化学计量学,亲和力和焓,得到。运行更多的试验,根据不同的缓冲区或温度条件下,可以得到更详细的信息,有关系统。一个协议是为一个国际贸易中心实验的基本格局。
ITC已广泛用于蛋白配体,12 DNA配体13和RNA 大分子的14项研究的研究与学习的配体大分子的相互作用,11。 ITC甚至可以运行,即形成均匀的悬浮固体材料,如纳米粒子。15此外,三元体系,其中一个配体已经绑定到高分子和滴定第二配体,可以被用来确定了热力学,例如,基板具有约束力一种酶的辅助因子的系统。研究还可以进行具有很高的亲和力,通常会超过执行竞争较弱的具有约束力的配体结合分析国际贸易中心的检测限为分子16。弱约束力的信息配体可以通过竞争分析17约束作用的水可以通过探索,随着溶剂重组焓的依赖国际贸易中心,18 19最近,DnaK的变种构象变化的热力学测定后绑定ADP和ATP,可以由国贸中心 20蛋白的蛋白质协会研究,产生异质复合物 21以及HOMO关联的信息 。22的结合焓温度效应会给绑定事件的热容量2的数量结合后吸收或释放的质子,也可以从不同的电离焓的缓冲区进行实验来确定。5,如果更多的国际贸易中心的研究是在不同pH值,那么有可能确定所涉及组的pKa 23。
总之,精确的测量大分子与配体的浓度是一个良好的国际贸易中心实验来说是必要的。样品浓度也需要一个适当的范围内内,以获得可靠的数据。护理应采取的缓冲区,小分子杂质和pH值不匹配,会造成在热谱文物。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是支持由NSF资助MCB – 0817827。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
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1.7 mL microcentrifuge tubes | Fisher Scientific | 02-681-282 |
15 mL falcon tubes | Fisher Scientific | 14-959-49B |
2.5 mL Hamilton syringe | MicroCal | SYN161714 |