在实验室工作时,当务之急是减少污染源。无菌技术是指允许转让,同时避免与非无菌表面的接触文化和试剂的程序。血清移液器和micropipettors,用于测量精确量不妥协的解决方案,在实验中使用的无菌。
微生物无处不在 – 在空气,土壤,人体以及实验室长凳和电脑键盘一样的老成表面上。微生物无处不在实验室建立一个供应丰富的潜在污染物。为了确保实验的成功,设备和工作表面上的污染物数量必须减少。许多微生物学实验中常见的是涉及文化含有细菌细胞或病毒颗粒的测量和传输的技术。要做到没有非无菌表面接触或污染无菌媒体要求:(1)准备无菌工作区,(2)精确设置和准确读取液体无菌转让文书,(3)正确操作仪器,文化瓶,瓶管内无菌领域。学习这些程序的培训和实践要求。起初,行动应该是缓慢的,故意的,和无菌ţ目标控制echnique成为第二本性在替补席上时。在这里,我们目前测量血清移液器和micropipettors的本生灯创造一个无菌的领域内使用的卷的步骤。卷的范围从微升(μL),毫升(ml)根据使用的仪器。通常转移的液体,包括无菌肉汤或化学溶液以及细菌培养和噬菌体股票。通过这些程序后,学生应该能够:
无菌技术指的是一套做是为了防止无菌解决方案和文化,成为在实验室中的有害微生物污染的例行程序。这种技术是必不可少的,需要生长的细胞的实验。虽然1工作设置完全无菌能不能得到实现,如实验室的表面进行消毒,创建1无菌领域使用本生灯,限制封顶文化和媒体曝光的空气消毒,如瓶,管及玻璃吸管材料的程序,避免接触表面非无菌的无菌文书,减少污染实验中的解决方案和文化的可能性。我们的目标是成为第二自然这些预防程序;培训和实践,同时在实验室工作。
用无菌解决方案和培养,使用,如血清移液器和麦克风文书传输量ropipettors是在实验室进行的常规技术的种类很多。仪器能够转移不同,但精准,体积不同实验应用程序调用。血清移液器用于微生物实验室准备需要媒体的筹备工作涉及毫升体积的细胞培养,而micropipettors是必不可少的分子生物学实验需要的解决方案,仅微升。当这些文书实行无菌技术,污染最小化无论在体积转让金额液体或类型的实验。
虽然没有在这个协议的讨论,通常用于防止污染等手段之一是工作在层流罩( 图10)。此设备是组织文化归类为BLS-2或更高的微生物实验的关键。层流罩,包含了HEPA(高效率微粒空气)过滤器,除去空气中的污染物,从引擎盖到流动的空气,同时防止未经过滤的空气渗透到工作区的房间。值得注意的是,不能用于本生灯内的层流罩,因为从火焰的热量会破坏空气流罩的功能至关重要。
检查您的无菌技术质量,进行实验时,它往往是有益的。以确认解决方案和文化传媒不要在实验操作污染,随时准备阴性对照 。例如,如果准备细菌培养生长的肉汤管,不要只留下无菌媒体接种一管。孵育然后检查未接种的迹象,如无意引入到管的有害细胞的生长浊度污染控制管一起接种管的介质。如果被污染的控制管,管的实验很可能被污染的同时,将不得不重复实验。这些预防措施应做到每一个实验。
The authors have nothing to disclose.
特别感谢IROC设计CORI桑德斯准备插图和克里斯Reddi在加州大学洛杉矶分校,为建立数字样品文化。霍华德休斯医学研究所(HHMI的批准号:52006944),为这个项目提供了资金。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
LB Broth | Difco | 244620 | Recipe also available in reference 6 |
TE Buffer: | |||
EDTA disodium salt dihydrate | Sigma | E5134 | |
Trizma-HCl | Sigma | T-3253 | |
CiDecon | Decon Laboratories, Inc. | 8504 | Disinfectant |
Ethanol | Fisher Scientific | A406 | For use as disinfectant, prepare 70%(v/v) with distilled water |