عند العمل في المختبر، لا بد من الحد من مصادر التلوث. تقنية العقيم يشير إلى الإجراءات التي تسمح لنقل الثقافات والكواشف مع تجنب الاتصال مع المنظمات غير معقمة السطوح. وتستخدم ماصات المصلية وmicropipettors لقياس كميات الدقيق دون المساس عقم الحلول المستخدمة في التجارب.
الكائنات الحية الدقيقة في كل مكان – في الهواء والتربة، وجسم الإنسان وكذلك على الأسطح غير حية مثل المقاعد ومختبر لوحة مفاتيح الحاسوب. في كل مكان من الميكروبات يخلق امدادات وفيرة من الملوثات المحتملة في المختبر. لضمان نجاح التجربة، يجب أن يكون الحد الأدنى لعدد من الملوثات على الأسطح والمعدات والعمل. المشترك بين العديد من التجارب في علم الأحياء المجهرية من التقنيات التي تنطوي على قياس ونقل الثقافات التي تحتوي على الخلايا البكتيرية أو الجسيمات الفيروسية. للقيام بذلك من دون الاتصال غير معقمة أو الأسطح الملوثة وسائل الاعلام عقيمة يتطلب (1) إعداد مساحة عمل عقيم، (2) تحدد بدقة وقراءة بدقة الأدوات اللازمة لنقل العقيم من السوائل، و (3) معالجة بشكل صحيح من الصكوك والثقافات قوارير وزجاجات و أنابيب داخل حقل معقمة. تعلم هذه الإجراءات تدعو إلى تدريب وممارسة. في البداية، وينبغي اتخاذ إجراءات قد تكون بطيئة، مدروسة، والتي تسيطر عليها مع هدف يجري لتي العقيمechnique لتصبح طبيعة ثانية عند العمل على مقاعد البدلاء. هنا نقدم خطوات لقياس حجم استخدام ماصات المصلية وmicropipettors داخل حقل العقيمة التي أنشأتها ناسخ بنسن. أحجام تتراوح ما بين microliters (ميكرولتر) إلى ملليلتر (مل) اعتمادا على الأداة المستخدمة. نقل السوائل عادة تشمل حساء عقيم أو المحاليل الكيميائية، وكذلك الثقافات البكتيرية وأسهم فج. باتباع هذه الإجراءات، يجب أن يكون الطلاب قادرين على:
تقنية العقيم ويشير إلى مجموعة من الإجراءات الروتينية القيام به لمنع الحلول العقيمة والثقافات من أن تصبح ملوثة غير مرغوب فيه من قبل الكائنات الحية الدقيقة في المختبر. هذه التقنيات ضرورية لإجراء التجارب التي تتطلب الخلايا المتنامية. على الرغم من عدم إعداد العمل الذي هو عقيم تماما أن يتحقق، والإجراءات مثل تعقيم السطوح مختبر، وخلق مجال معقم باستخدام موقد بنسن، والحد من التعرض للثقافات لم يسبق لهم اللعب ووسائل الإعلام في الهواء، وتعقيم المواد مثل الأنابيب والزجاجات والماصات الزجاجية، وتجنب الاتصال مع الأدوات المعقمة غير معقمة أسطح يقلل من احتمال تلوث الحلول والثقافات في تجربة. والهدف من ذلك هو لهذه الإجراءات الاحترازية لتصبح طبيعة ثانية، وهذا يأتي مع التدريب والممارسة بينما كان يعمل في المختبر.
نقل وحدة التخزين مع حلول عقيمة والثقافات باستخدام أدوات مثل الماصات المصلية وهيئة التصنيع العسكريropipettors هي واحدة من العديد من أنواع تقنيات روتين عمله في أحد المختبرات. التطبيقات التجريبية المختلفة استدعاء لأدوات قادر على نقل متميزة، وأحجام دقيقة بعد دقيقة و،. وتستخدم ماصات المصلية في مختبرات علم الأحياء الدقيقة لإعداد مزارع الخلايا التي تتطلب استعدادات وسائل الإعلام التي تشمل وحدات التخزين ملليلتر، بينما micropipettors ضرورية لتجارب البيولوجيا الجزيئية التي تحتاج إلى كميات ميكروليتر فقط من الحلول. عندما يمارس أسلوب العقيم مع هذه الصكوك، والتقليل من التلوث أثناء عمليات النقل بغض النظر عن حجم كمية من السائل أو النوع من التجارب.
على الرغم من عدم مناقشتها في هذا البروتوكول، واحد وسيلة أخرى تستخدم عادة لمنع التلوث هو العمل داخل غطاء محرك السيارة تدفق رقائقي (الشكل 10). هذه المعدات هو أمر حاسم لزراعة الأنسجة وللتجارب أجريت مع الكائنات الحية الدقيقة المصنفة BLS-2 أو أعلى. غطاء تدفق رقائقي يحتوي على (HEPA ذات الكفاءة العاليةالهواء جسيمات) مرشح أن يزيل الملوثات المحمولة جوا من الجو التي تصب في غطاء محرك السيارة في حين منع الهواء فلتر من غرفة من تتخلل مساحة العمل. من المذكرة، لا يمكن أن تستخدم موقد بنسن داخل الصفحي غطاء محرك السيارة، لأن تدفق الحرارة من لهب يعطل تدفق الهواء أساسي إلى وظيفة غطاء محرك السيارة.
غالبا ما يكون من المفيد للتحقق من جودة الأسلوب الخاص بك العقيم عند تنفيذ التجارب العملية. للتأكد من الحلول وليس وسائل الإعلام ثقافة للتلوث خلال التلاعب التجريبية، وإعداد عنصر تحكم دائما سلبية. على سبيل المثال، إذا كان إعداد أنابيب من مرق لنمو الثقافات البكتيرية، لا تطعيم أنبوب واحد ترك وسائل الاعلام فقط العقيمة. احتضان والمتوسطة إلى جانب أنابيب تلقيح ثم تفقد السيطرة أنبوب uninoculated بحثا عن علامات على تلوث مثل تعكر من نمو الخلايا غير المرغوب فيها وعرض عن غير قصد في أنبوب. إذا كانت ملوثة أنبوب السيطرة، وأنبوب التجريبيةمن المرجح تكون ملوثة أيضا، وهذه التجربة لا بد من تكرارها. وينبغي القيام بهذه التدابير الاحترازية مع كل تجربة.
The authors have nothing to disclose.
الشكر الخاص لساندرز كوري في تصاميم يروك لإعداد الرسوم التوضيحية وكريس Reddi في جامعة كاليفورنيا لإقامة الثقافات عينة للشخصيات. تم توفير التمويل لهذا المشروع من قبل HHMI (HHMI منحة رقم 52006944).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
LB Broth | Difco | 244620 | Recipe also available in reference 6 |
TE Buffer: | |||
EDTA disodium salt dihydrate | Sigma | E5134 | |
Trizma-HCl | Sigma | T-3253 | |
CiDecon | Decon Laboratories, Inc. | 8504 | Disinfectant |
Ethanol | Fisher Scientific | A406 | For use as disinfectant, prepare 70%(v/v) with distilled water |