Metodi per il trasferimento rapido e localizzazione di agenti patogeni malattia di Lyme All'interno della Gut Tick
Summary
Malattia di Lyme studi di ricerca spesso richiedono la generazione di zecche infette dal patogeno Borrelia burgdorferi, un processo che richiede in genere diverse settimane. Qui si dimostrano una microiniezione procedura basata infezione zecca che può essere compiuto entro poche ore. Abbiamo anche dimostrare un metodo di immunofluorescenza per la localizzazione in situ di B. burgdorferi in zecche.
Abstract
La malattia di Lyme è causata da infezione con il patogeno spirocheta Borrelia burgdorferi, che è mantenuto in natura da una zecca-roditore ciclo di infezione 1. Un zecche modello murino 2 è stato sviluppato per studiare la malattia di Lyme in laboratorio. Mentre zecche ingenuo può essere infettato con B. burgdorferi nutrendole sui topi infetti, il processo di muta impiega diverse settimane o mesi per essere completata. Pertanto, lo sviluppo di tecniche di zecca più rapido ed efficace l'infezione, come una procedura di microiniezione-based, è uno strumento importante per lo studio della malattia di Lyme 3,4. La procedura richiede ore solo per generare zecche infette e consente di controllare l'erogazione di quantità uguali di spirochete in una coorte di zecche. Ciò è particolarmente importante come la generazione di B. burgdorferi zecche infette dal processo di alimentazione naturale usando topi non riesce a garantire tasso di infezione del 100% e, potenzialmente, si traduce in variazione di carico patogeno tra zecche nutriti. Inoltre, la microiniezione può essere usato per infettare le zecche con B. burgdorferi isola nei casi in cui un ceppo attenuato non è in grado di stabilire l'infezione nei topi e quindi non può essere acquisita naturalmente dalle zecche 5. Questa tecnica può essere utilizzata anche per fornire una varietà di altri materiali biologici in zecche, per esempio, gli anticorpi specifici o di RNA a doppio filamento 6. In questo articolo, ci dimostrerà la microiniezione di zecche ninfale con in vitro-grown B. burgdorferi. Ci sarà anche descrivere un metodo per la localizzazione di agenti patogeni della malattia di Lyme nell'intestino zecca con microscopia confocale immunofluorescenza.
Protocol
Discussion
Qui si dimostrano una microiniezione procedura basata per l'infezione rapida ed efficiente dei ninfale zecche Ixodes con il batterio patogeno B. burgdorferi. Abbiamo anche descrivere una procedura di immunofluorescenza confocale per il rilevamento di B. burgdorferi nell'intestino zecca in situ. Anche se la nostra manifestazione coinvolge intestino ninfale, procedure simili sono applicabili anche per le altre fasi di sviluppo delle zecche, come larve o gli adulti 8,9. Tuttavi…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo sinceramente i membri del laboratorio Pal per l'assistenza con la preparazione di questa manifestazione. Questo studio è stato supportato da PHS concede AI076684 e AI080615 dal NIH / NIAID.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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