Métodos para a transferência rápida e localização de Patógenos Doença de Lyme no intestino Tick
Summary
Estudos de pesquisa a doença de Lyme muitas vezes exigem a geração de carrapatos infectados com o patógeno Borrelia burgdorferi, um processo que normalmente leva várias semanas. Aqui nós demonstramos uma microinjeção baseado procedimento de infecção do carrapato que pode ser realizado em poucas horas. Nós também demonstramos um método de imunofluorescência para na localização in situ de B. burgdorferi dentro de carrapatos.
Abstract
A doença de Lyme é causada por infecção com o patógeno espiroqueta Borrelia burgdorferi, que é mantido na natureza por um ciclo de infecção do carrapato roedor-1. Um modelo murino carrapatos 2 foi desenvolvido para estudar a doença de Lyme no laboratório. Enquanto carrapatos ingênuo pode ser infectado com B. burgdorferi, alimentando-os em camundongos infectados, o processo de muda leva várias semanas ou meses para ser concluído. Portanto, o desenvolvimento de técnicas de assinalar mais rápida e eficiente a infecção, como um procedimento de microinjeção de base, é uma importante ferramenta para o estudo da doença de Lyme 3,4. O procedimento requer apenas algumas horas para gerar os carrapatos infectados e permite o controle sobre a entrega de quantidades iguais de espiroquetas em uma coorte de carrapatos. Isto é particularmente importante como a geração de B. carrapatos infectados por burgdorferi o processo de alimentação natural, utilizando camundongos não consegue garantir a taxa de infecção de 100% e, potencialmente, resulta em variação de carga de patógenos entre os carrapatos alimentados. Além disso, a microinjeção pode ser usado para infectar carrapatos com B. burgdorferi isolados em casos em que uma cepa atenuada é incapaz de estabelecer a infecção em camundongos e, portanto, não pode ser adquirida naturalmente por carrapatos 5. Esta técnica também pode ser usado para fornecer uma variedade de outros materiais biológicos em carrapatos, por exemplo, anticorpos específicos ou dupla stranded RNA 6. Neste artigo, vamos demonstrar a microinjeção de carrapatos ninfal com in vitro-grown B. burgdorferi. Iremos também descrever um método para a localização de patógenos a doença de Lyme no intestino tick usando microscopia confocal de imunofluorescência.
Protocol
Discussion
Aqui demonstramos um procedimento baseado microinjeção de infecção rápida e eficaz de carrapatos Ixodes ninfal com o agente patogénico B. burgdorferi. Descrevemos também um procedimento confocal de imunofluorescência para a detecção de B. burgdorferi no intestino carrapato in situ. Embora a nossa demonstração envolve gut ninfal, procedimentos semelhantes são também aplicáveis para outros estágios de desenvolvimento dos carrapatos, como larva ou adulto 8,9. No e…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nós sinceramente agradecer aos membros do laboratório de Pal para a assistência com a preparação desta demonstração. Este estudo foi suportado por concessões PHS AI076684 e AI080615 do NIH / NIAID.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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