틱 굿 내에서 빠른 전송과 라임 질병 병원균의 현지화을위한 방법
Summary
라임 질병 연구 조사는 종종 병원체 Borrelia burgdorferi, 일반적으로 몇 주 정도 소요 프로세스에 감염된 진드기의 생성을 필요로합니다. 여기 시간 이내에 수행할 수 있습니다 microinjection 기반 틱 감염 절차를 보여줍니다. 우리는 또한 진드기 이내 B. burgdorferi의 현장 지방화에 대한 immunofluorescence 방법을 보여줍니다.
Abstract
라임 병은 진드기 – 설치류 감염 사이클 1 자연 유지 spirochete 병원체 Borrelia burgdorferi와 감염에 의해 발생합니다. 틱 – 부담 murine 모델 2 실험실에서 라임 병을 연구하기 위해 개발되었습니다. 나이브 진드기는 B.에 감염 될 수 있지만 burgdorferi 감염 생쥐에서 그들을 먹이로, 털갈이 과정을 완료하는 데 개월 몇 주간 소요됩니다. 따라서, 이러한 microinjection 기반의 프로 시저로보다 신속하고 효율적인 틱 감염 기법의 개발 라임 질병 3,4의 연구를위한 중요한 도구입니다. 절차는 시간이 감염된 진드기를 생성하기 위해 필요하며 진드기의 코호트에서 spirochetes의 동일한 수량의 배달 제어할 수 있습니다. 이것은 B.의 세대로서 특히 중요합니다 마우스를 사용하여 자연적인 먹이 프로세스 burgdorferi 감염 진드기는 먹이 거려 사이에 병원균 부담의 변화 100 %의 감염 속도와 잠재적 결과를 보장하기 위해 실패합니다. 또한, microinjection은 B.와 진드기를 감염하는 데 사용할 수 있습니다 burgdorferi는 감쇠 변형 생쥐에 감염을 설정할 수 없습니다이며, 따라서 자연 진드기 5 인수 수없는 경우에는 분리합니다. 이 방법은 또한 진드기에 다른 생물 학적 재료의 다양한 제공하는 데 사용할 수있는 예를 들어, 특정 항체 또는 두 RNA 6 좌초. 이 문서에서는, 우리는 B를 체외에서 재배한에서 함께 nymphal 진드기의 microinjection을 설명합니다 burgdorferi. 우리는 또한 공촛점 immunofluorescence 현미경을 사용하여 체크 굿에서 라임 병의 병원균의 국산화에 대한 방법을 설명합니다.
Protocol
Discussion
여기서 우리는 세균성 병원체 B.와 nymphal Ixodes의 진드기의 신속하고 효율적인 감염 microinjection 기반의 절차를 입증 burgdorferi. 우리는 또한 B.의 검색을위한 공촛점 immunofluorescence 절차를 설명 현장에서 틱 용기 burgdorferi. 우리의 시위는 nymphal 직감을 포함하지만, 이와 유사한 절차 또한 유충이나 성인 8,9 등 진드기의 다른 발달 단계에 대해 적용됩니다. 그러?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 진심으로이 예제의 준비와 지원을 팔 실험실의 구성원 감사합니다. 이 연구는 NIH / NIAID에서 PHS 부여 AI076684 및 AI080615 지원했다.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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