रैपिड और टिक आंत के भीतर Lyme रोग रोगज़नक़ों के स्थानीयकरण के हस्तांतरण के लिए तरीके
Summary
Lyme रोग अनुसंधान अध्ययन अक्सर रोगज़नक़ Borrelia burgdorferi, एक प्रक्रिया है कि आमतौर पर कई सप्ताह लगते के साथ संक्रमित ticks की पीढ़ी की आवश्यकता है. यहाँ हम एक टिक microinjection आधारित संक्रमण प्रक्रिया है कि घंटों के भीतर पूरा किया जा सकता है प्रदर्शित करता है. हम भी ticks भीतर बी burgdorferi के स्वस्थानी स्थानीयकरण में एक के लिए immunofluorescence विधि का प्रदर्शन.
Abstract
Lyme रोग spirochete रोगज़नक़ Borrelia burgdorferi, जो प्रकृति में संक्रमण टिकटिक कृंतक एक चक्र के द्वारा बनाए रखा है के साथ संक्रमण के कारण होता है. एक टिक जनित murine 2 मॉडल Lyme रोग प्रयोगशाला में अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है. जबकि भोले ticks बी से संक्रमित किया जा सकता है है burgdorferi उन्हें संक्रमित चूहों पर खिला द्वारा कई हफ्तों molting प्रक्रिया महीने के लिए पूरा करने के लिए लेता है . इसलिए, एक microinjection आधारित प्रक्रिया के रूप में और अधिक तेजी से और कुशल टिकटिक संक्रमण तकनीक, के विकास Lyme रोग 3,4 के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है. प्रक्रिया केवल घंटे संक्रमित ticks उत्पन्न करने के लिए की आवश्यकता है और ticks की एक पलटन में spirochetes के बराबर मात्रा में के वितरण पर नियंत्रण की अनुमति देता है. यह विशेष रूप से बी की पीढ़ी के रूप में महत्वपूर्ण है burgdorferi प्राकृतिक खिला चूहों प्रक्रिया का उपयोग कर के द्वारा संक्रमित ticks खिलाया ticks के बीच 100% संक्रमण दर और रोगज़नक़ बोझ से भिन्नता में संभावित परिणाम को सुनिश्चित करने में विफल रहता है. इसके अलावा, microinjection बी के साथ ticks संक्रमित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है burgdorferi मामलों में जहां एक तनु तनाव चूहों में संक्रमण की स्थापना करने में असमर्थ है और इस तरह स्वाभाविक रूप से 5 ticks द्वारा नहीं प्राप्त किया जा सकता में आइसोलेट्स. इस तकनीक को भी ticks में अन्य जैविक सामग्री की एक किस्म देने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, विशिष्ट एंटीबॉडी या डबल 6 शाही सेना फंसे. इस अनुच्छेद में, हम साथ में बी इन विट्रो हो nymphal ticks के microinjection प्रदर्शन करेंगे burgdorferi. हम भी टिकटिक confocal immunofluorescence माइक्रोस्कोपी का उपयोग पेट में Lyme रोग रोगजनकों के स्थानीयकरण के लिए एक विधि का वर्णन करेंगे.
Protocol
Discussion
यहाँ हम nymphal Ixodes ticks के तेजी से और कुशल संक्रमण के लिए जीवाणु रोगज़नक़ बी के साथ एक microinjection आधारित प्रक्रिया का प्रदर्शन burgdorferi. हम भी बी का पता लगाने के लिए एक confocal immunofluorescence प्रक्रिया का वर्णन बगल में ट…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम ईमानदारी से इस प्रदर्शन की तैयारी के साथ सहायता के लिए पाल प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद. इस अध्ययन PHS AI076684 और अनुदान NIH / NIAID से AI080615 द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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