Méthodes de transfert rapide et la localisation des agents pathogènes dans l'intestin de Lyme Tick
Summary
Des études de Lyme recherche sur les maladies nécessitent souvent de génération de tiques infectées par l'agent pathogène Borrelia burgdorferi, un processus qui prend généralement plusieurs semaines. Ici nous démontrons une procédure basée sur la microinjection tic infection qui peut être accompli en quelques heures. Nous démontrons également une méthode d'immunofluorescence pour la localisation in situ de B. burgdorferi dans les tiques.
Abstract
La maladie de Lyme est causée par une infection par le spirochète pathogène Borrelia burgdorferi, qui est maintenu dans la nature par un cycle d'infection chez les rongeurs tic-1. Un modèle murin tiques 2 a été développé pour étudier la maladie de Lyme dans le laboratoire. Alors que les tiques peuvent être naïfs infectés par B. burgdorferi en les nourrissant sur des souris infectées, le processus de mue prend plusieurs semaines à plusieurs mois à compléter. Par conséquent, le développement des plus rapides et plus efficaces les techniques infection des tiques, comme une procédure basée sur la micro-injection, est un outil important pour l'étude de la maladie de Lyme 3,4. La procédure nécessite quelques heures seulement de générer des tiques infectées et permet de contrôler la livraison des quantités égales de spirochètes dans une cohorte de tiques. Ceci est particulièrement important que la génération de B. tiques infectées burgdorferi par le processus d'alimentation naturelle en utilisant des souris ne parvient pas à assurer un taux d'infection de 100% et potentiellement entraîne une variation de la charge de pathogènes chez les tiques nourries. Par ailleurs, la microinjection peut être utilisé pour infecter les tiques avec B. burgdorferi des isolats dans les cas où une souche atténuée est incapable d'établir une infection chez les souris et donc ne peut pas être acquise naturellement par les tiques 5. Cette technique peut également être utilisé pour offrir une variété d'autres matériaux biologiques dans les tiques, par exemple, des anticorps spécifiques ou l'ARN double brin 6. Dans cet article, nous allons démontrer la microinjection de tiques nymphes aux in vitro grandi B. burgdorferi. Nous allons également décrire une méthode pour la localisation de la maladie de Lyme pathogènes dans l'intestin tic utilisant microscopie confocale à immunofluorescence.
Protocol
Discussion
Ici nous démontrons une procédure basée sur la micro-injection d'infection rapide et efficace de la tique Ixodes nymphes avec la bactérie pathogène B. burgdorferi. Nous décrivons également une procédure d'immunofluorescence confocale pour la détection de B. burgdorferi dans l'intestin tic in situ. Bien que notre démonstration implique l'intestin nymphes, des procédures similaires sont également applicables à d'autres stades de développement des tiques, comme l…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions sincèrement les membres du laboratoire Pal pour l'aide à la préparation de cette manifestation. Cette étude a été soutenue par PHS subventions AI076684 et AI080615 de NIH / NIAID.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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