莱姆病的病原体的蜱肠道内的快速传递和本地化的方法
Summary
莱姆病的研究往往需要一代感染的蜱与莱姆病螺旋体的病原体，这一过程通常需要几个星期的。在这里，我们展示了一个基于显微注射蜱感染过程，可在数小时内完成。我们也证明内蜱免疫荧光法在B的螺旋体原位本地化。
Abstract
莱姆病是由螺旋体的病原体伯氏疏螺旋体 ，保持它在本质上是由蜱灭鼠感染周期1感染引起的。蜱传播的小鼠模型已发展到在实验室中研究莱姆病。虽然天真蜱可感染与 B 螺旋体感染小鼠喂养，蜕皮过程需要几个星期到几个月才能完成。因此，发展更迅速，更高效的蜱感染技术，如显微注射为基础的程序，是为莱姆病3,4研究的重要工具。过程需要几个小时，以产生感染的蜱，并允许在同等数量的螺旋体的蜱队列交付的控制。这是B 的一代尤为重要螺旋体感染的蜱自然喂养利用老鼠进行的过程中失败，以确保100％的感染率和病原体的负担变化的潜在的结果除美联储蜱。此外，显微注射，可用于感染蜱与 B 螺旋体分离的情况下，弱毒株不能建立在小鼠体内的感染，并因此不能自然由蜱5收购。这种技术也可用于成蜱提供多种其他生物材料，例如，特异性抗体或双链RNA 6。在这篇文章中，我们将证明在体外生长B.若虫蜱显微注射螺旋体 。我们还将描述为莱姆病的病原体在蜱肠道使用共聚焦免疫荧光显微镜的本地化方法。
Protocol
Discussion
在这里，我们展示一个基于显微注射过程快速，高效的蜱若虫硬蜱感染的细菌病原体B.螺旋体 。我们还描述了B 的检测共聚焦免疫程序螺旋体在蜱肠道原位 。虽然我们的演示涉及若虫肠道，类似的程序也适用其他蜱的发育阶段，如幼虫或成虫8,9 ，。然而，由于其较小的尺寸，该技术可能会比较具有挑战性的幼虫，但应在成年蜱适用。 与 B蜱人工感染其他?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
协助编制本示范的PAL实验室的成员，我们衷心感谢。这项研究是支持小灵通NIH / NIAID的赠款AI076684和AI080615。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
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