Hızlı Aktarım ve Lyme Hastalığı Patojenler lokalizasyonu için işaretleyin Gut içinde Yöntemleri
Summary
Lyme hastalığı araştırma çalışmaları, genellikle bir süreç genellikle birkaç hafta sürer patojen Borrelia burgdorferi ile enfekte kenelerin nesil gerektirir. Burada saat içinde yapılabilir mikroenjeksiyon tabanlı bir kene enfeksiyonu prosedürü göstermektedir. Ayrıca keneler içinde B. burgdorferi in situ lokalizasyonu için immünofloresan yöntemi göstermektedir.
Abstract
Lyme hastalığı kene kemirgen enfeksiyon döngüsü 1 doğa korunur spirochete patojen Borrelia burgdorferi ile enfeksiyona neden olur. Kene kaynaklı bir fare modelinde 2 laboratuvar Lyme hastalığı araştırmak için geliştirilmiştir . Naif keneler B ile enfekte olabilir burgdorferi enfekte fareler üzerinde onları beslemek, döküm işlemi tamamlamak için ay birkaç hafta sürer. Bu nedenle, mikroenjeksiyon tabanlı bir prosedür olarak daha hızlı ve verimli bir kene enfeksiyonu teknikleri, geliştirme, Lyme hastalığı 3,4 çalışması için önemli bir araçtır. Bu prosedür, sadece saat keneler üretmek için gerektirir ve bir kohort keneler spiroketlerine eşit miktarlarda teslim üzerinde kontrol sağlar. Bu nesil olarak B. özellikle önemlidir fareler kullanarak doğal beslenme süreci burgdorferi keneler beslenen keneler arasında patojen yükünün değişimi% 100 enfeksiyon oranı ve potansiyel sonuçları sağlamak için başarısız olur. Ayrıca, mikroenjeksiyon, B ile keneler enfekte için kullanılabilir burgdorferi bir zayıflatılmış gerginlik farelerde enfeksiyon kuramadı ve böylece doğal keneler 5 tarafından elde edilemez durumlarda izole eder. Bu teknik aynı zamanda kenelerin diğer biyolojik malzemelerin çeşitli sunmak için kullanılabilir, örneğin, spesifik antikorlar veya çift RNA 6 telli . Bu makalede, B. in vitro yetiştirilen nymphal keneler mikroenjeksiyon gösterecektir burgdorferi. Biz de, Lyme hastalığı kene gut konfokal immünofloresan mikroskopi kullanılarak patojenlerin lokalizasyonu için bir yöntem anlatacağım.
Protocol
Discussion
Burada bakteriyel patojen B. nymphal Ixodes keneler hızlı ve etkin enfeksiyon mikroenjeksiyon tabanlı bir prosedür göstermek burgdorferi. Ayrıca B. tespiti için bir konfokal immünofloresan prosedürü tarif in situ kene gut burgdorferi. Bizim gösteri nymphal gut ibaret olmasına rağmen, benzer prosedürler, larva veya yetişkin 8,9 olarak keneler diğer gelişim evreleri için de geçerlidir . Ancak, küçük boyutu nedeniyle, teknik larvaları kullanmak …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz içtenlikle Pal laboratuvar üyeleri bu gösteri hazırlığı ile ilgili yardım için teşekkür ederim. Bu çalışma NIH / NIAID PHS hibe AI076684 ve AI080615 tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
| Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
| Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
| Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
| Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
| Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |
Referenzen
- Steere, A. C., Coburn, J., Glickstein, L. The emergence of Lyme disease. J Clin Invest. 113, 1093-1101 (2004).
- Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T., Samuels, D. S., Radolf, J. D. . Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. , 353-405 (2010).
- Pal, U. OspC facilitates Borrelia burgdorferi invasion of Ixodes scapularis salivary glands. J Clin Invest. 113, 220-230 (2004).
- Yang, X. F., Pal, U., Alani, S. M., Fikrig, E., Norgard, M. V. Essential role for OspA/B in the life cycle of the Lyme disease spirochete. J Exp Med. 199, 641-648 (2004).
- Zhang, X., Yang, X., Kumar, M., Pal, U. BB0323 function is essential for Borrelia burgdorferi virulence and persistence through tick-rodent transmission cycle. J Infect Dis. 200, 1318-1330 (2009).
- Pal, U. TROSPA, an Ixodes scapularis receptor for Borrelia burgdorferi. Cell. 119, 457-468 (2004).
- Barbour, A. G. Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes. Yale J Biol Med. 57, 521-525 (1984).
- Narasimhan, S. Disruption of Ixodes scapularis anticoagulation by using RNA interference. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 1141-1146 (2004).
- Narasimhan, S. A tick antioxidant facilitates the Lyme disease agent’s successful migration from the mammalian host to the arthropod vector. Cell Host Microbe. 2, 7-18 (2007).
- Broadwater, A. H., Sonenshine, D. E., Hynes, W. L., Ceraul, S., DeSilva, A. Glass capillary tube feeding: a method for infecting nymphal Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) with the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 39, 285-292 (2002).
- Policastro, P. F., Schwan, T. G. Experimental infection of Ixodes scapularis larvae (Acari: Ixodidae) by immersion in low passage cultures of Borrelia burgdorferi. J Med Entomol. 40, 364-370 (2003).
- Fuente, d. e. l. a., Kocan, J., M, K., Almazan, C., Blouin, E. F. RNA interference for the study and genetic manipulation of ticks. Trends Parasitol. 23, 427-433 (2007).
