مخصص الصينية النامية الهامستر بروتين الخلية المبيض في استضافة فحوصات باستخدام التكنولوجيا الصوتية Microparticle الغشائية
Summary
يوصف تطوير المقايسات على منصة مخصصة لVIBE أكثر حساسية والنتائج واستنساخه في مصفوفات الآلي المعقدة. خرطوشة عالمي يسمح المقايسات تكييفها بسهولة للاستخدام مع فحوصات مخصصة. هذا التنوع يتيح التطور السريع والتحقق من صحة الرواية أو الإصدارات المقايسات الآلي دليل المقايسات القائمة ، والمتمثلة في هذا الفيديو.
Abstract
غالبا ما تكون محدودة فحوصات مخصصة للبروتينات فريدة لاكتشاف دليل تستهلك الوقت والتقنيات الكميات مثل ELISA أو البقع الغربية نظرا لتعقيد وضع على منصات بديلة. BioScale غشاء الصوتية الملكية MicroParticle (AMMP) التكنولوجيا يسمح المناعية شطيرة المتقدمة بسهولة للاستخدام على منصة VIBE ، وتوفير أفضل الحساسية ، واستنساخ ، وتشغيل الآلي. على النحو المنصوص عليه على سبيل المثال ، هذا البروتوكول يحدد الإجراء مخصص لوضع الهامستر الصيني بروتين الخلية المبيض ، المضيف (تشو المندوبية) مقايسة. ويمكن تتبع المبادئ العامة التي وردت هنا من أجل تطوير مجموعة واسعة من المناعية.
وهو مستضد AMMP التدابير تركيز الفحص عن طريق قياس التغيرات في وتيرة التذبذب الناجمة عن ربط المجهرية الدقيقة لسطح حساس لحساب. وهو يتألف من أربعة عناصر رئيسية هي : (1) خرطوشة تحتوي على رقاقة الاستشعار functionalized ثمانية (2) الأجسام المضادة المسماة المغناطيسي المجهرية الدقيقة ، (3) ناشبة الأضداد الموسومة التي تربط على سطح الرقاقة functionalized (4) تحتوي على عينات من مستضد الفائدة. جهاز الاستشعار البيولوجي BioScale هو جهاز الرنين أن يحتوي على ثمانية مسارات فردية مع الأغشية fluidic منفصلة. الأغشية تغيير التردد التذبذب ردا على تراكم الكتلة على السطح ، ويستخدم هذا التردد لتغيير quantitate مقدار كتلة المضافة.
لتسهيل استخدامها في مجموعة متنوعة واسعة من المناعية هو functionalized المجس مع الأضداد المضادة للالناشبة. يتم تعديل مقايسة الأضداد محددة من خلال اقتران التساهمية من علامة ناشبة لأحد الأجسام المضادة والبيوتين إلى أخرى. يستخدم التسمية البيوتين لربط الأجسام المضادة لstreptavidin الخرز المغناطيسي الذي يقترن ، في تركيبة مع الأضداد الموسومة ناشبة ، تستخدم لالتقاط الحليلة في شطيرة. مجمع بربط الشريحة من خلال التفاعل anti-hapten/hapten. في نهاية كل تجربة تشغيل أجهزة الاستشعار يتم تنظيفها مع حمض مخفف تمكين التحليل المتسلسل من أعمدة من لوحة 96 – جيدا.
هنا ، نقدم طريقة لوضع مخصص مقايسة AMMP تشو المندوبية العمليات الحيوية من أجل التنمية. ويمكن تطوير أو تعديل المقايسات AMMP المقايسات القائمة في المقايسات AMMP تقديم أداء أفضل (استنساخ ، والحساسية) في عينات معقدة وتقليل الوقت المشغل. بروتوكول يبين الخطوات من أجل التنمية واستعراض نتائج مناقشة الفرع التمثيلي. للحصول على شرح أكثر تعمقا التحسين مقايسة والمعلمات الاتصال BioScale التخصيص. تقدم هذه المجموعة عام المقايسات تطوير العمليات البيولوجية مثل البروتينات المتبقية ألف عيار المنتج ، وتشو المندوبية.
Protocol
Discussion
الأمثلة السالفة الذكر لتبين النتائج AMMP الكمية حساسة للغاية في عينات معقدة. هذا الأداء ، عند تسليمها مع سهولة والسيطرة على الكواشف التنسيق في هذا النظام هو تمكين لمجموعة متنوعة من التطبيقات. قد تكون هذه التطبيقات لهدف محدد ، كما في Gadd34 في الورم ، أو عامة لطائفة من الأهداف ، كما هو الحال في الخلية المضيفة وكشف عن البروتين في عينات من الكميات التي تعبر تنقية دفق. فيبي انخفاض النفقات العامة جنبا إلى جنب مع AMMP منصة مرنة للغاية ويوفر أداة قوية لتقديم فحوصات حرجة.
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NHS-Chromogenic-biotin or NHS-Chromogenic Biotin Labeling kit | ||||
| If NHS-Chromogenic-biotin is purchased as a reagent the following additional materials will be required | ||||
| Water-miscible organic solvent such as dimethylsulfoxide (DMSO) or dimethylformamide (DMF) | ||||
| Phosphate buffered saline (PBS) or other amine free buffer (pH 7 – 9) | ||||
| Desalting columns or dialysis units for buffer exchange | ||||
| Spectrophotometer able to measure 354 and 280 nm – for measuring protein and biotin concentrations | ||||
| Biotinylated antibody (2-5 biotins/Ab) | ||||
| Streptavidin magnetic beads | BioScale | (10 mg/mL) ~108 beads/mg | ||
| Magnet for microcentrifuge tubes | New England BioLabs | cat # S1510S | ||
| Biotinylated BSA for blocking | ||||
| Phosphate buffered saline (PBS) | ||||
| PBS 0.1% Tween 20 | ||||
| Vortex | ||||
| Microcentrifuge holder for Vortex or tube rotator | ||||
| Antibody or protein to be labeled | ||||
| NHS-Fluorescein or NHS-Fluorescein Labeling kit | ||||
| If NHS-Fluorescein is purchased as a reagent the following additional materials will be required | ||||
| Water-miscible organic solvent such as dimethylsulfoxide (DMSO) or dimethylformamide (DMF) | ||||
| 50 mM borate, pH 8.5 or other amine free buffer (pH 7 – 9) | ||||
| Desalting columns or dialysis units for buffer exchange | ||||
| Measurement of protein and fluorescein concentrations requires a spectrophotometer able to measure 493 and 280 nm. | ||||
| Diluent | BioScale | to dilute beads and FlAb | ||
| Sample Diluent | BioScale | to dilute samples and calibrators | ||
| Running Buffer Additive | BioScale |
