食物を与えられていないダニへのdsRNAの注射により、RNA干渉(RNAi)のための方法が記載されている。 RNAiは、遺伝子操作の他のメソッドの使用が制限されているダニの中で最も広く使用されている遺伝子サイレンシング技術です。
ダニは、野生と家畜と人間の真正の吸血性外部寄生虫であり、ヒトの疾患1、畜牛業界世界中で2を影響を与える最も重要なベクトルのベクトルとしての蚊への2番目の世界的であると考えられている。チックはサブクラスダニ目、注文Parasitiformes、亜Ixodidaに分類され、北極から熱帯地域3に世界的に分布している。ダニの蔓延を制御するための努力にもかかわらず、これらの外部寄生虫は、人間と動物の健康に深刻な問題が4,5のまま。
RNA干渉(RNAi)6遺伝子機能や代謝経路への影響を判断するために、遺伝子発現の混乱を含む核酸系逆遺伝学的ア プローチです。低分子干渉RNA(siRNA)は二本鎖RNA(dsRNA)とdsRNAのトリガ7月9日と同じ配列を含む細胞質mRNAの強力な配列特異的分解の結果によって開始されるRNAi経路のエフェクター分子である。 dsRNAをによって開始された転写後遺伝子サイレンシングのメカニズムがすべての真核生物で発見されたことはこれまで研究し、RNAiは、急速に機能ゲノミクス研究やその他のアプリケーション10のツールとしてさまざまな生物で開発されています。
RNAiは、遺伝子操作のための代替アプローチが利用できなかったり、信頼できない5,11であるダニや他の生物の中で最も広く使用されている遺伝子サイレンシング技術となっている。ダニの遺伝的特性は、RNAiの12,13の最近の応用まで限定されている。 RNAiは利用可能であることを短い時間で、それはダニの遺伝子機能を研究するための貴重なツール、ダニ媒介病原体のインタフェースの特性評価とスクリーニングとダニ防御抗原14の特性であることが証明されました。ここで、食物を与えられていないダニへのdsRNAの注入によるRNAiの方法が記載されている。それはこの実験的なアプローチから得られた知識は、基本的な生物学的システムの理解とダニの蔓延を制御し、ダニ媒介性病原体15-19伝送を予防するワクチンの開発に著しく寄与する可能性があります。
他の方法がダニ14 33にRNAiに記載されているが、dsRNAの注射は、ここで説明する最も広く食物を与えられていない(表1)と供給チック16,25,34の両方で使用されています。 RNAiは、ダニの遺伝子機能の研究、ダニ媒介病原体のインタフェースの特性評価とスクリーニングとダニ防御抗原14,35の特性評価のための有用なツールであることが示されている。特に、RNAiは、チック35の機能解析のための最も有効なツールとなっています。
方法論的に、RNAiは、おそらく多数の個人の遺伝子のノックダウンを可能にすることがより効率的な方法に進化していきます。ダニでdsRNA誘発性RNAiのメカニズムは、この種の35,36でこの遺伝学的ア プローチの理解と活用に貢献する洗練されるべきである。マダニにおけるRNAiのオフターゲット効果の程度は、完全に14,27を対処する必要がある重要な問題です。最後に、RNAiはほとんどの可能性ダニの遺伝子制御とシステム生物学の研究に総合的な貢献を提供し、ダニ – 病原体のインタフェースとダニの蔓延とダニ媒介性病原体の伝播を制御するためのワクチン開発に影響を及ぼす可能性があります。
The authors have nothing to disclose.
我々は、有意義な議論と技術支援のために我々の研究室のメンバーに感謝。このビデオプレゼンテーションは、研究と獣医病理学科のための副学部長、獣医健康科学センター、オクラホマ州立大学によってサポートされていました。研究がMinisterioデCiencia電子Innovación、スペイン(プロジェクトBFU2008-01244/BMC)、JFにCSIC学内プロジェクトPA1002451によって資金を供給された、ウォルターR. SitlingtonはKMK、CVHS 2009 RAC助成金、OAESに食用動物の研究のための椅子を寄附アニマルヘルスファンドと米国農務省、国立研究イニシアチブ競争グラント、第2007〜04613。
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Access RT-PCR system | Promega | A1250 | ||
Purelink PCR purification kit | Invitrogen | K3100-02 | ||
Megascript RNAi kit | Ambion | AM1626M | ||
Red dental wax | Electron Microscopy Sciences | 72674 | ||
Plastic cups, 1.25 oz and lids | Solo Cup Company, Urbana Ill. | |||
Fine forceps | Electron Microscopy Sciences | Various | ||
Insulin syringe | Monoject | Fitted with a ½”, 29 gauge needle | ||
Hamilton syringe | Hamilton | 701SN,33/.375”/45DGR | Custom made | |
TriReagent | Sigma | 93289 | ||
iScript One-Step RT-PCR Kit with SYBR Green | Bio-Rad | 170-8892 | ||
Real-time PCR detection system | Bio-Rad | Several | Please refer to http://www.bio-rad.com/ |