DsRNA का भूखा ticks में इंजेक्शन द्वारा शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) के लिए एक विधि का वर्णन है. आरएनएआई ticks जहां आनुवंशिक हेरफेर के अन्य तरीकों का उपयोग सीमित किया गया है में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल तकनीक जीन मुंह बंद है.
Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors of human diseases1 and the most important vectors affecting cattle industry worldwide2. Ticks are classified in the subclass Acari, order Parasitiformes, suborder Ixodida and are distributed worldwide from Arctic to tropical regions3. Despite efforts to control tick infestations, these ectoparasites remain a serious problem for human and animal health4,5.
RNA interference (RNAi)6 is a nucleic acid-based reverse genetic approach that involves disruption of gene expression in order to determine gene function or its effect on a metabolic pathway. Small interfering RNAs (siRNAs) are the effector molecules of the RNAi pathway that is initiated by double-stranded RNA (dsRNA) and results in a potent sequence-specific degradation of cytoplasmic mRNAs containing the same sequence as the dsRNA trigger7-9. Post-transcriptional gene silencing mechanisms initiated by dsRNA have been discovered in all eukaryotes studied thus far, and RNAi has been rapidly developed in a variety of organisms as a tool for functional genomics studies and other applications10.
RNAi has become the most widely used gene-silencing technique in ticks and other organisms where alternative approaches for genetic manipulation are not available or are unreliable5,11. The genetic characterization of ticks has been limited until the recent application of RNAi12,13. In the short time that RNAi has been available, it has proved to be a valuable tool for studying tick gene function, the characterization of the tick-pathogen interface and the screening and characterization of tick protective antigens14. Herein, a method for RNAi through injection of dsRNA into unfed ticks is described. It is likely that the knowledge gained from this experimental approach will contribute markedly to the understanding of basic biological systems and the development of vaccines to control tick infestations and prevent transmission of tick-borne pathogens15-19.
हालांकि अन्य तरीकों ticks, 14, 33 में आरएनएआई के लिए में वर्णित किया गया है, dsRNA के इंजेक्शन यहाँ वर्णित है सबसे व्यापक रूप से दोनों (तालिका 1) भूखा और खिलाया 16,25,34 ticks में इस्तेमाल किया है. आरएनएआई टिकटिक जीन समारोह के अध्ययन, इंटरफ़ेस टिक – रोगज़नक़ के लक्षण वर्णन और स्क्रीनिंग और टिकटिक सुरक्षात्मक 14,35 प्रतिजनों के लक्षण वर्णन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण होना दिखाया गया है . विशेष रूप में, आरएनएआई ticks 35 में कार्यात्मक विश्लेषण के लिए सबसे महत्वपूर्ण उपकरण बन गया है .
Methodologically, आरएनएआई की संभावना अधिक कुशल तरीके है कि व्यक्तियों की एक बड़ी संख्या में जीन पछाड़ना अनुमति दे सकता है में विकसित होगा. ticks में dsRNA प्रेरित आरएनएआई के तंत्र के लिए एक बेहतर समझ और इस 35,36 प्रजातियों में इस आनुवंशिक दृष्टिकोण का उपयोग के लिए योगदान करने के लिए परिष्कृत किया जाना चाहिए. ticks में आरएनएआई के बंद लक्ष्य प्रभाव की हद तक भी एक महत्वपूर्ण सवाल है कि जरूरतों के लिए पूरी तरह से 14,27 संबोधित किया जाना है. अंत में, आरएनएआई सबसे अधिक संभावना टिकटिक जीन विनियमन और प्रणालियों जीव विज्ञान के अध्ययन के लिए व्यापक योगदान प्रदान करेगा और टिक रोगज़नक़ इंटरफेस और टीकों के विकास पर एक प्रभाव टिकटिक infestations और टिक जनित रोगज़नक़ों के संचरण को नियंत्रित करने के लिए हो सकता है.
The authors have nothing to disclose.
हम उपयोगी विचार विमर्श और तकनीकी सहायता के लिए हमारे प्रयोगशालाओं के सदस्यों को धन्यवाद. यह वीडियो प्रस्तुति अनुसंधान और पशु चिकित्सा pathobiology विभाग के लिए एसोसिएट डीन, पशु चिकित्सा स्वास्थ्य विज्ञान के लिए केंद्र, ओकलाहोमा स्टेट यूनिवर्सिटी द्वारा समर्थित किया गया. अनुसंधान Ministerio डे Ciencia ई Innovación, स्पेन (परियोजना BFU2008-01244/BMC), CSIC JF अंदर PA1002451 परियोजना द्वारा वित्त पोषित किया गया था, वाल्टर आर Sitlington KMK, CVHS 2009 आरएसी अनुदान, OAES खाद्य पशु अनुसंधान के लिए अध्यक्ष संपन्न पशु स्वास्थ्य फंड और USDA, राष्ट्रीय अनुसंधान पहल प्रतियोगी अनुदान, 2007-04613 सं.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
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Access RT-PCR system | Promega | A1250 | ||
Purelink PCR purification kit | Invitrogen | K3100-02 | ||
Megascript RNAi kit | Ambion | AM1626M | ||
Red dental wax | Electron Microscopy Sciences | 72674 | ||
Plastic cups, 1.25 oz and lids | Solo Cup Company, Urbana Ill. | |||
Fine forceps | Electron Microscopy Sciences | Various | ||
Insulin syringe | Monoject | Fitted with a ½”, 29 gauge needle | ||
Hamilton syringe | Hamilton | 701SN,33/.375”/45DGR | Custom made | |
TriReagent | Sigma | 93289 | ||
iScript One-Step RT-PCR Kit with SYBR Green | Bio-Rad | 170-8892 | ||
Real-time PCR detection system | Bio-Rad | Several | Please refer to http://www.bio-rad.com/ |