Une méthode pour l'interférence ARN (ARNi) par injection d'ARNdb dans les tiques à jeun est décrite. L'ARNi est le plus largement utilisé gène-taire technique dans les tiques où l'utilisation d'autres méthodes de manipulation génétique a été limitée.
Les tiques sont des ectoparasites hématophages n'oblige d'animaux sauvages et domestiques et des humains, et sont considérés comme deux mondial pour les moustiques vecteurs de maladies humaines 1 et les vecteurs les plus importants qui affectent l'industrie du bétail dans le monde 2. Les tiques sont classés dans la sous-classe, Acari Parasitiformes ordre, sous-ordre Ixodida et sont distribués dans le monde de l'Arctique aux régions tropicales 3. Malgré les efforts pour contrôler les infestations de tiques, ces ectoparasites demeurent un problème grave pour la santé humaine et animale 4,5.
L'interférence ARN (ARNi) 6 est une approche inverse base d'acides nucléiques génétique qui implique la perturbation de l'expression des gènes afin de déterminer la fonction du gène ou de son effet sur une voie métabolique. Petits ARN interférents (siRNA) sont les molécules effectrices de la voie de l'ARNi qui est initiée par l'ARN double brin (ARNdb) et aboutit à une séquence-spécifique de dégradation des ARNm cytoplasmiques puissants contenant la même séquence que la gâchette ARNdb 7-9. Mécanismes post-transcriptionnels silençage génique initiée par ARNdb ont été découverts dans tous les eucaryotes étudiés jusqu'à présent, et l'ARNi a été rapidement développée dans une variété d'organismes comme un outil de génomique fonctionnelle et d'autres applications 10.
L'ARNi est devenu le plus largement utilisé gène-taire technique dans les tiques et les autres organismes où les approches alternatives pour la manipulation génétique ne sont pas disponibles ou ne sont pas fiables 5,11. La caractérisation génétique des tiques a été limité jusqu'à ce que l'application récente de l'ARNi 12,13. Dans le court laps de temps que l'ARNi a été disponible, il s'est avéré être un outil précieux pour étudier la fonction des gènes de tiques, la caractérisation de l'interface de tic-pathogène et le criblage et la caractérisation des antigènes protecteurs tic 14. Ici, une méthode pour l'ARNi par injection d'ARNdb dans les tiques à jeun est décrite. Il est probable que les connaissances acquises de cette approche expérimentale contribuera sensiblement à la compréhension de base des systèmes biologiques et le développement de vaccins pour contrôler les infestations de tiques et de prévenir la transmission du tic-pathogènes 15-19.
Bien d'autres méthodes ont été décrites pour l'ARNi dans les tiques 14, 33, l'injection d'ARNdb décrite ici est la plus largement utilisée dans les deux jeun (tableau 1) et nourris tiques 16,25,34. ARNi a été montré pour être un outil précieux pour l'étude de la fonction des gènes de tiques, la caractérisation de l'interface de tic-pathogène et le dépistage et la caractérisation des antigènes protecteurs tic 14,35. En particulier, l'ARNi est devenu l'outil le plus précieux pour l'analyse fonctionnelle dans les tiques 35.
Méthodologiquement, l'ARNi évoluera probablement dans les méthodes plus efficaces qui peuvent permettre inactivation génique dans un grand nombre d'individus. Le mécanisme de l'ARN double brin induite par ARNi dans les tiques doivent être affinés pour contribuer à une meilleure compréhension et l'utilisation de cette approche génétique chez cette espèce 35,36. L'ampleur des effets hors-cible de l'ARNi dans des tiques est également une question importante qui doit être pleinement pris en compte 14,27. Enfin, l'ARNi sera très probablement apporter une contribution globale de l'étude de la régulation des gènes tiques et la biologie des systèmes et le tic-pathogène interface et peut avoir un impact sur le développement de vaccins pour contrôler les tiques et la transmission des agents pathogènes transmis par les tiques.
The authors have nothing to disclose.
Nous remercions les membres de nos laboratoires pour des discussions fructueuses et une assistance technique. Cette présentation vidéo a été soutenue par le doyen associé de la recherche et le Département de biopathologie vétérinaires, Centre de sciences vétérinaires de la santé, de l'Oklahoma State University. La recherche a été financée par le Ministerio de Ciencia e Innovación, l'Espagne (projet BFU2008-01244/BMC), la SCCI projet intra-muros PA1002451 à JF, le Walter R. Sitlington de la chaire de recherche d'aliments pour animaux de KMK, 2009 CVHS CAR subvention, EOA Fonds de la santé animale et de l'USDA, National Research Grant initiative concurrentielle, n ° 2007-04613.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
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Access RT-PCR system | Promega | A1250 | ||
Purelink PCR purification kit | Invitrogen | K3100-02 | ||
Megascript RNAi kit | Ambion | AM1626M | ||
Red dental wax | Electron Microscopy Sciences | 72674 | ||
Plastic cups, 1.25 oz and lids | Solo Cup Company, Urbana Ill. | |||
Fine forceps | Electron Microscopy Sciences | Various | ||
Insulin syringe | Monoject | Fitted with a ½”, 29 gauge needle | ||
Hamilton syringe | Hamilton | 701SN,33/.375”/45DGR | Custom made | |
TriReagent | Sigma | 93289 | ||
iScript One-Step RT-PCR Kit with SYBR Green | Bio-Rad | 170-8892 | ||
Real-time PCR detection system | Bio-Rad | Several | Please refer to http://www.bio-rad.com/ |