婦人科腫瘍におけるセンチネルリンパ節の術中検出のためのマルチスペクトルのリアルタイム蛍光イメージング

1。術中マルチスペクトル蛍光カメラカスタムメイドのカメラシステムは、SurgOptix（SurgOptix株式会社、レッドウッドショアーズ、カリフォルニア州、米国）と共同で緊密に生物医学イメージングのための研究所（IBMI、工科大学/ヘルムホルツZentrum、ミュンヘン、ドイツ）で開発さで開発されました。術中マルチスペクトル蛍光カメラシステムのセットアップを図2に示されています。 光は、光学系のシステムを通過し、可視光、発光（蛍光）の波長帯における光と励起波長帯の光に分離される。これらのバンドルは、CCD -カメラ（CCD）（図2）によって検出されています。すべてのカメラからのマルチスペクトル信号は、アーチファクトを補正し、真の定量的な蛍光色素の生体分布を得るために処理されます。色と蛍光信号は、外部モニタ上で個別の画像として表示されるか、一つの画像に重ね合わせることができます。 カメラの励起と発光のフィルターはそれぞれ750 nmのおよび800 ± 20 nmで収集する測定ここで設定されます。 2。光造影剤の調製蛍光造影剤は、グリーン（ICG、Pulsion AG、ミュンヘン、ドイツ）は無菌条件下で調製されるインドシアニン。は0.5 mg / mLの濃度が使用されます。後者は集計にICGを発生するので、滅菌蒸留水ではなく、塩化ナトリウム（NaCl）を使用することが重要です。 調製後、溶液を漂白することにより、蛍光強度の速い劣化を避けるために、暗い、涼しい場所に保管する必要があります。注：このポイントから前方に光から保護ICGを保つ。 3。術中イメージング – ICGのセットアップと注入カメラが配置され、標準的な外科手術との干渉を最小限に抑えるために手術前に手術室で開始され、高精細画面（図2B）に接続されている。 カメラは、滅菌や衣服の研究者によって標準的な滅菌ドレープ（カールツァイスビジョンBV、スリードレヒト、オランダ、OPMIドレープREF 306071）で覆われている。 注：色付きの消毒剤はしばしば自家蛍光であるとイメージングの手順に干渉する可能性があるとして、唯一の明確な消毒剤を使用するように注意を払わない。また、滅菌ドレープと手術のマーカーは、自家蛍光することができます。それは手術前に自家蛍光のためにORと営業分野で使用されるすべての材料をテストすることをお勧めします。 蛍光造影剤は、グリーン（ICG）は無菌条件下で調製されるインドシアニン。は0.5 mg / mLの濃度が使用されます。後者は集計にICGの原因となるので、それは、NaClの滅菌蒸留水を使用することが重要とではありません。調製後、溶液を蛍光強度の速い劣化を避けるために、暗い、涼しい場所に保管する必要があります。注：それは、ICGを準備した後、手袋を変更することをお勧めしますICGの流出のにも少量のように画質に影響を与える可能性があります。 撮像法は、腹部を開いた後に開始されます。関心の領域が露出されると、カメラが動作してフィールドに操縦されている。ズームとフォーカスは、無菌条件下で調整されます。手術室の灯りは、蛍光信号の良好な検出のためにオフになります。 は0.5 mg / mLのICGの1.0 mLを、1つの注射器で標準青色色素（パテントブルー/ブルーpatenté、ゲルベ、フランス）の1.0 mLを混合される。外科医は、エージェントの流出を防止する、原発腫瘍周囲4つの象限に造影剤を注入します。注：手術用手袋でICGの流出の場合には、それが手袋を変更する必要がある。静止画像やリアルタイムのビデオは、リンパの流れと蛍光センチネルリンパ節（図3）の外観を取得しています。すべての画像やビデオを直接コンピュータに保存されます。 離れて蛍光から、SLNは、どちらガンマプローブまたは目視検査によって青色変色するため、または両方を使用して、標準プロトコルにしたがって検出される。放射性トレーサーは、一般的にlymphoscintigramが放射性SLNの検出のために実行された後、手術前に一日に投与される。これは標準的な手順の一部であり、蛍光イメージングプロトコルで場所がない。 SLNのリアルタイム切除は、リンパ節の蛍光と青色の変色の両方によって導かれる。カメラのリアルタイム機能は、任意の残存蛍光または蛍光灯のノードの予想外のローカライズのために検出するのに役立ちます。 SLNの切除後に、ex vivoでの画像は、蛍光シグナルの存在を全摘出したリンパ節の取得されています。 （図4）静止画をキャプチャするときに露光時間は、より高い分解能のために延長することができます。 リンパ節の病理組織学的検査ではセンチネルリンパ節の腫瘍細胞の有無を明らかにする。 4。 Representative結果蛍光リンパ節は、高い信号対バックグラウンド比を検出することができます。また、リンパ管を通っICGの流れをリアルタイムでリンパ節のマッピングを可能にモニタすることができます。結果は、おそらく別の照明の手順は、検出を達成するために必要とする、ノードの深さの増加によって影響を受ける可能性があります。特定の腫瘍標的蛍光剤の将来のアプリケーションは、この技術を用いて癌細胞陽性SLNの術中検出を提供することがあります。 図1。センチネルリンパ節（SLN）の理論。SLNは、腫瘍からの最初の流入領域リンパ節（秒）です。 図2。マルチスペクトル蛍光カメラシステムの概略図の写真（）。手術室でのカメラシステムの基本的なセットアップ（B）。 図3。外陰癌におけるリンパ節のマルチスペクトル蛍光イメージング。 生体内のリンパ節（）のカラー画像。 生体内で同じリンパ節、（B）の蛍光画像。カラー画像（C）に重畳された擬似カラー蛍光画像。 図4。子宮頸がんのリンパ節のex vivoでのマルチスペクトル蛍光イメージング。リンパ節生体外で （）のカラー画像。同じリンパ節、ex vivoで （B）の蛍光画像。カラー画像（C）に重畳された擬似カラー蛍光画像。