Enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT): Kwantificering van de Th-1 cellulaire immuunreacties tegen microbiële antigenen
Summary
Identificatie van microbiële doelstellingen van adaptieve immuniteit in idiopathische ziekte kan worden bewerkstelligd door het gebruik van het enzym-linked immunospot assay.
Abstract
Adaptive immuniteit is een belangrijk onderdeel van de klaring van intracellulaire pathogenen. De mogelijkheid om te detecteren en kwantificeren van deze reacties bij de mens is een belangrijk diagnostisch hulpmiddel. Het enzym-linked immunospot assay (ELISPOT) wint aan populariteit om zijn vermogen om cellulaire immuunresponsen te identificeren tegen microbiële antigenen, waaronder immuunsysteem populaties zoals die met HIV-infectie, transplantatie, en het gebruik van steroïden. Deze test heeft de capaciteit om de immuunrespons tegen specifieke microbiële antigenen, evenals onderscheiden of deze reacties zijn Th1 of Th2 van karakter te kwantificeren. ELISPOT is niet beperkt tot de plaats van de ontsteking. Het is veelzijdig in zijn vermogen om te beoordelen voor de immuunrespons in het perifere bloed, maar ook als gebieden van actieve betrokkenheid, zoals bronchoalveolaire lavage, cerebrospinale vloeistof, en ascites. Detectie van immuunresponsen gericht tegen een of meerdere antigenen is mogelijk, evenals specifieke epitopen binnen de microbiële eiwitten. Deze test maakt detectie van immuunreacties in de tijd, evenals verschillen in antigenen herkend door gastheer T-cellen. Tweekleurige ELISPOT-tests zijn beschikbaar voor de detectie van gelijktijdige expressie van twee cytokines. Recente toepassingen voor deze techniek onder de diagnose van extrapulmonale tuberculose, evenals onderzoek naar de bijdrage van besmettelijke antigenen aan auto-immuunziekten.
Protocol
Discussion
De ELISPOT assay heeft ontpopt als een van de belangrijkste en meest gebruikte testen om te controleren immuunrespons bij de mens en een verscheidenheid aan andere soorten. Met de ELISPOT-test, kan het immuunsysteem cel frequenties worden gemeten aan de enkele cel niveau zonder uitbreiding of manipulatie van celpopulaties. ELISPOT test is op grote schaal toegepast om antigeen specifieke immuunrespons te onderzoeken in verschillende ziekten, waaronder infecties, kanker, allergieën en auto-immuunziekten. De toepassing va…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Mede ondersteund door Vanderbilt CTSA subsidie 1 UL1 RR024975 van het National Center for Research Resources, National Institutes of Health. Dit werk werd gefinancierd door NIH R01 HL 83839; R01 AI 65.744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
Referenzen
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
