成人北极黄鼠海马神经干细胞的生长和分化
Summary
准备从成人非冬眠周岁北极地松鼠（AGS）海马神经干细胞。这些神经干细胞可以通过许多段落扩大，分化和保持了近50:50的神经元的神经胶质文化。
Abstract
北极地松鼠（Urocitellus parryii，AGS）是独特的能力与核心体温接近或低于冻结1休眠。这些动物也抵制在体内 2,3和氧糖剥夺在体外 4,5脑缺血损伤。这些独特的品质提供了动力隔离AGS的神经元的研究神经元固有的特点，可占为AGS神经元的能力，以抵御缺血引起的损伤和细胞死亡和极冷温度。识别蛋白或靶基因，使这些细胞的独特属性，能够在发现有效的治疗缺血性标志和耐冷性研究的援助。成人AGS海马包含神经干细胞继续增殖，从而在培养这些干细胞易于扩展。我们在这里描述的方法，研究人员可以利用这些干细胞和分化的神经元为任意数量的目的。密切下列步骤AGS神经干细胞可以扩大通过两个或以上的通道，然后分化文化TUJ1阳性神经元（〜50％），无需使用有毒化学品，以尽量减少细胞分裂的数量高。缺血诱导神经元的6和神经通过MEK / ERK和PI3K/Akt生存信号通路，有助于缺血抵抗 体内 7 和 8（凯莱赫-安德森， 德鲁等，在准备中）在体外进行。这些独特的神经细胞的进一步鉴定，可以提前在许多方面，使用部分或所有这些方法。
Protocol
1。 AGS神经干细胞和介质的制备成人海马北极地松鼠（AGS）神经干细胞分离的方式描述9现在可以得到商业冻存瓶。细胞被运往含有干冰，以确保这些细胞在冷冻保存的状态保持在绝缘包过夜。为了保持完整性，解压后立即接收和储存的细胞，在低比-150 ° C，或在气相的液氮杜瓦。 准备agsNSC基础培养基+ 5％FBS加入5毫升FBS（LS – 1012）95毫升agsNSC基础培养基准备加入500μL?…
Discussion
AGS成人神经干细胞是强大的，可扩大许多段落，使他们基本的神经干细胞特性的研究神经干细胞的极好来源。扩张的速度大约是一增加一倍，每二十四小时，但这些细胞必须达到汇合前传，因为细胞之间的接触将有利于星形胶质细胞分化。联系介导的分化将因此导致的神经元细胞总数的比例急剧下降，如果分化开始之前，胰蛋白酶和通过。图1说明了一个AGS神经干细胞培养，应在24小时内传。
<…Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国陆军医学研究和装备司令部授予＃05178001 NS041069 – 06由美国国家神经疾病与中风研究所的支持。我们感谢乔尔Vonnahme议定书的有益的意见。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
Referenzen
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Tags
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Diesen Artikel zitieren
Drew, K. L., McGee, R. C., Wells, M. S., Kelleher-Andersson, J. A. Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells. J. Vis. Exp. (47), e2199, doi:10.3791/2199 (2011).