Bu kağıt büyüyen farklı yöntemleri açıklar.<em> Pseudomonas aeruginosa</em> Kültürlü insan hava yolu epitel hücreleri üzerinde biyofilm. Bu protokoller, biyofilm birim (CFU) oluşturan koloni ölçme, biyofilm boyama ve biyofilm sitotoksisite eğitimi, biyofilm görselleştirme dahil olmak üzere farklı yönlerini biyofilm oluşumu, çalışma adapte edilebilir.
Bakteriyel biyofilm farklı insan hastalıklarının bir numara ile ilişkili olduğu, ancak biyofilm gelişimi genellikle cansız yüzeyler üzerinde çalışılmıştır. Bu çalışmada, kültür ortamında yetişen insan hava yolu epitel hücreleri (CFBE hücre) oluşturan Pseudomonas aeruginosa biyofilm için protokolleri açıklar. İlk yöntem (Statik Co-kültür Biyofilm Modeli olarak adlandırılan), P. aeruginosa, standart doku kültürü plakaları confluent mono tabakaları olarak yetişen CFBE hücreleri ile inkübe edilir . Bakterinin epitel hücreleri oldukça toksik olmasına rağmen, yeterince uzun arginin gecikmeler tek tabaka imha ek biyofilm için CFBE hücreleri oluşturmak için. İkinci yöntem (Akış Hücre Co-kültür Biyofilm Modeli olarak adlandırılır), biyofilm araştırma, CFBE hücrelerinin konfluent tek tabaka destekleyen bir cam lamel karşılamak için genellikle kullanılan bir biyofilm akış hücresi aparatı, adaptasyonu içerir. Bu tek tabaka P. inoküle aeruginosa ve peristaltik bir pompa sonra hücreler boyunca taze orta akar. Her iki sistemde de, bakteriyel biyofilm aşılama sonrası 6-8 saat içinde oluşur. Biyofilm Görselleştirme P. tarafından geliştirilmiş. aeruginosa suşları yapısal yeşil floresan proteininin (GFP) dile getirdi. Statik ve Akış Hücre Co-kültür Biyofilm deneyleri erken P. için model sistemler Kistik Fibrozis (KF) akciğer, ve bu tekniklerin P. aeruginosa enfeksiyonu farklı yönlerini izin aeruginosa biyofilm oluşumu ve virülans biyofilm sitotoksisite, biyofilm CFU ölçümü ve biyofilm boyama ve görselleştirme dahil olmak üzere, ele alınmalıdır.
Biyofilmler çevresel uyaranlara yanıt form bakteri toplulukları. Bu çevresel sinyaller, bir yüzey, toplama, exopolysaccharides üretim ve artan antibiyotik direnci 10 gibi diğer fenotipleri bağlanarak her bakteri içinde küresel düzenleyici değişimlere neden olmaktadır . Son birkaç on yıllar boyunca, pek çok kanıt biyofilmler kronik enfeksiyonların patogenezi büyük bir rol oynadığı hipotezini desteklemiştir. Örneğin, çok iyi kabul edilir P. aeruginosa, biyofilm 11…
The authors have nothing to disclose.
Biz bu modellerin geliştirilmesinde rehberlik ve önerileriniz için G. Ç Toole teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Kistik Fibrozis Vakfı (ANDERS06F0 GGA, STANTO07RO ve STANTO08GA BAS), Ulusal Sağlık Enstitüleri (GGA ve R01-HL074175 – BAS T32A107363) tarafından desteklenen ve Biyomedikal Araştırma Mükemmellik için, Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezleri Merkezi (BAS Cobre P20-RR018787).
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
FCS2 (Focht Live-Cell) chamber | Bioptechs, Butler, PA | 060319131616 | ||
FCS2 chamber controller | Bioptechs, Butler, PA | 060319-2-0303 | ||
40 mm glass coverslips | Bioptechs, Butler, PA | PH 40-1313-0319 | ||
MEM | Mediatech, Manassass, VA | #10-010-CV | ||
MEM without phenol red | Mediatech, Manassass, VA | Mediatech, Manassass, VA |