3の幼虫分節神経の可視化 RD齢ショウジョウバエ幼虫準備
Summary
キイロショウジョウバエの幼虫は、幼虫の分節神経内軸索輸送のメカニズムを調べるために理想的なモデルシステムを提供しています。この手順を使用して、様々な変異を有する第3齢幼虫は、野生型の幼虫と比較することができます。
Abstract
キイロショウジョウバエのため、特に便利な遺伝学と完全に配列ゲノムの神経系の発達と機能を研究するための強力なモデル系として浮上している。さらに、幼虫の神経系は、幼虫の体節神経が体の長さに沿って終点の脳とその神経終末内にあるそれらの細胞体と軸索の束が含まれているように軸索輸送のメカニズムを研究する理想的なモデルシステムです。ここでは、幼虫の分節神経内シナプス小胞タンパク質の可視化のための手順を説明します。正しく行えば、神経系のすべてのコンポーネントは、そのような筋肉やNMJsなどの関連組織と一緒に、、そのまま無傷、および可視化する準備が残ります。様々な変異を有する第3齢幼虫は、解剖固定、シナプス小胞の抗体と共にインキュベートし、可視化と野生型の幼虫と比較されます。この手順は、簡単に幼虫分節神経内で観察することができる様々なタンパク質の分布にいくつかの異なるシナプスや神経細胞の抗体と変化に適応することができます。
Protocol
Discussion
ショウジョウバエ幼虫の分節の神経は軸索輸送のメカニズムを研究する強力なシステムです。第3齢幼虫の解剖が正しく行われている場合、このような筋肉やNMJsなどのCNS、PNS、および関連組織のすべてのコンポーネントは、単一の幼虫の中で調べることができます。我々はハードとサクストン（1996）によって発行されたものから、このプロトコルを適応している。このプロト?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SGは、ニューヨーク州立大学バッファロー校からとJohn R. Oishei財団からの資金によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
Referenzen
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetik. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
