3 Larvaların segmental sinirler Görselleştirme Rd Instar Drosophila Larvaların Hazırlıkları
Summary
Drosophila melanogaster larvaları larva segmental sinirler içinde aksonal taşıma mekanizmalarının araştırılması için ideal bir model sistem sağlar. Bu yordamı kullanarak, 3. instar larvaları çeşitli mutasyonları taşıyan vahşi tip larva mukayese edilebilir.
Abstract
Drosophila melanogaster, özellikle uygun genetik ve tam sıralı genom, sinir sisteminin gelişimi ve işlevi eğitim için güçlü bir model sistem olarak ortaya çıkmaktadır. Ayrıca, larva sinir sistemi, larva segmental sinirler, beyin ve sinir uçları vücut uzunluğu boyunca biten içinde bulunan hücre gövdeleri ile akson demetleri içerir aksonal taşıma mekanizmaları incelemek için ideal bir model sistem. Burada larva segmental sinirler içinde sinaptik vezikül proteinlerin görünüm için prosedürü açıklar. Eğer doğru yapılırsa, sinir sisteminin tüm bileşenleri, kas ve NMJs olarak ilişkili dokuları ile birlikte, sağlam, hasarsız ve görüntülenebilmekte hazır kalır. Çeşitli mutasyonları taşıyan 3. instar larvaları disseke, sabit, sinaptik vezikül antikorlar ile inkübe görüntülendi ve vahşi tip larvalara göre . Bu prosedür, larva segmental sinirler içinde kolayca görülebilir proteinlerin çeşitli dağıtım birkaç farklı sinaptik veya nöronal antikor ve değişiklikler için adapte edilebilir.
Protocol
Discussion
Drosophila larva segmental sinirler aksonal taşıma mekanizmaları incelemek için güçlü bir sistem. 3. instar larva diseksiyonu doğru yapılırsa, kas ve NMJs olarak MSS, PNS ve ilişkili doku, tüm bileşenleri tek bir larvanın içinde incelenebilir. Biz bu protokolü Hurd ve Saxton (1996) tarafından yayınlanan bir uyum var. Bu protokol aynı zamanda diğer nöronal antikor testi için adapte olabilir, ancak antikorlar optimizasyonu yapılmalıdır. Primer ve sekonder antikor inkübasyon s?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
Referenzen
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetik. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
