Summary

La metástasis experimentales y CTL Modelo inmunoterapia adoptiva de transferencia de ratón

Published: November 26, 2010
doi:

Summary

Una metástasis de pulmón y el modelo experimental de ratón para CTL inmunoterapia análisis de la interacción de las células tumorales las células-T<em> In vivo</em>.

Abstract

Modelo experimental de ratón metástasis es un modelo de metástasis simple y fisiológicamente relevantes. Las células tumorales se inyectan por vía intravenosa (iv) en las venas de la cola de ratón y colonizar en los pulmones, por lo tanto, semejante a los últimos pasos de la metástasis de células tumorales espontáneas: la supervivencia en la circulación, la extravasación y la colonización en los órganos distales. Desde el punto de vista terapéutico, el modelo experimental de metástasis es el modelo más simple y es ideal ya que el objetivo de las terapias es a menudo el punto final de la metástasis: tumor metastásico establecido en el órgano distal. En este modelo, las células tumorales se inyectan en las venas iv cola de ratón y se deja colonizar y crecer en los pulmones. Tumor-específica CTL se inyecta vía intravenosa en el ratón portador de metástasis. El número y tamaño de las metástasis pulmonares pueden ser controlados por el número de células tumorales a inyectar y el tiempo de crecimiento del tumor. Por lo tanto, las distintas etapas de la metástasis, las metástasis mínima a la metástasis extensa, se puede modelar. Las metástasis pulmonares son analizados por la inflación con la tinta, permitiendo así más fácil la observación visual y la cuantificación.

Protocol

1. Metástasis modelo experimental de ratón El día antes de la inyección de células tumorales, las semillas de un frasco T75 con un máximo de 1 x 10 7 CMS4-Met células en 10 ml de medio RPMI con 10% de suero para obtener rápido crecimiento de las células tumorales. Incubar toda la noche a 37 ° C. En el día de la inyección, se elimina el medio y lavar las células una vez con PBS, luego de la cosecha de las células tumorales con el 0,05% de tripsina-EDTA a 37 ° C durante 5 min…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Apoyado por becas de los Institutos Nacionales de Salud (CA133085 a KL) y la Sociedad Americana del Cáncer (RSG-09-209-01-TBG KL).

Materials

Solutions:

India Ink Solution (17):

  1. Pour 150 ml of distilled water into a 250 ml flask.
  2. Add 4 drops ammonium hydroxide to the distilled water.
  3. Add 30 ml India Ink stock (i.e. Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Item 44011) to the ammonia and water mixture.
  4. Top off with distilled water to a volume of 200 ml. Solution is ready for injection.

Fekete’s Solution (17):

Fekete’s solution is used to bleach India ink-inflated tumor-bearing lungs to distinguish white tumor nodules from the black background of normal tissues.

  1. Add 350ml 95% EtOH to 1L glass bottle.
  2. Add 150ml distilled water
  3. Add 50ml formaldehyde
  4. Add 25ml glacial acidic acid

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Diesen Artikel zitieren
Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model. J. Vis. Exp. (45), e2077, doi:10.3791/2077 (2010).

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