PDX Tümör Hücrelerini Etiketlemeye Dönüştürme: Tümör Hücresi In Vitro'ya Floresan İşaretleyiciyi İfade Eden Lentivirüs'ün Tanıtılması

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Hanna, C., vd. Meme Kanseri Hasta kaynaklı Ksinograftların Tümör Büyümesi ve Metastaz Çalışmaları için İzlenebilir Muhabirlerle Etiketlenerek Etiketlendi. J. Vis. Exp. (2016).

Aşağıdaki videoda, yeşil floresan protein ve luciferaz muhabirlerini tümör hücresi in vitrosuna ifade eden lentivirüsün tanıtılmasında kullanılan PDX tümör hücrelerini etiketlemeye (hasta kaynaklı ksenograftlar) dönüştürme tekniği açıklanmaktadır.

Protocol

1. PDX türevi Tümör Hücrelerinin Transdüksiyon Santrifüj 300 g x 5 dk’da tümör hücrelerini ayırır ve 2 ml mammosfer ortamlarında yeniden biriktirir. Trypan mavi dışlama kullanarak uygulanabilir hücreleri sayın (Sindirilmiş hücreleri 5 ml yıkama tamponunda yeniden yaşayın ve trippan mavi dışlama kullanarak hem uygulanabilir hem de canlı olmayan hücreleri sayın. Kısaca, 50 μl hücre ve 50 μl trippan mavisi karıştırın ve bir hemositometre kullanarak trypan-blue hariç hücreleri sa…

Representative Results

Şekil 1: Ayrışmış PDX Hücrelerinde Transdüksiyon Verimliliğini İzleme. A) PSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentiviral parçacıklarla transdüksiyondan 24 saat sonra insan epitel hücreleri (Lin+ tükenmesi) için zenginleştirilmiş PDX-dissositasyonlu hücreler. B) PDX-dissositlenmiş hücreler ayrı bir deneyden, epitel hücre zenginleştirmesi olmadan, pHAGE-EF1aL-luciferaz-UBC-GFP…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Materials

DMEM/F12 (1:1) Hyclone SH30023.01
bFGF BD Biosciences 354060
EGF BD Biosciences 354001
Heparin Sigma H4784
B27 Gibco/Thermo Fisher 17504-44
Anti-fungi-antibiotics Hyclone SV30010
HBSS Red Ca2+/Mg2+ free Hyclone SH30031.02
Hepes
Cultrex Cultrex 3433-005-01 Basement Matrix Extract (BME)
30 °C shaker NewBrunswick Scientific CO. INC Series 25 Incubator Shaker

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).

View Video