Transduktion för att märka PDX tumörceller: Introducerar Lentivirus som uttrycker fluorescerande markör i tumörcellen in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Hanna, C., et al. Märkning av bröstcancer patient-härledda Xenografts med spårbara reportrar för tumör tillväxt och metastasering studier. J. Vis. Exp. (2016).
Följande video beskriver en teknik för transduktion för att märka (patient-härledda xenografts) PDX tumörceller, som används för att införa lentivirus som uttrycker grönt fluorescerande protein och luciferas reportrar i tumör cellen in vitro.
Protocol
1. Transduktion av PDX-härledda tumörceller Centrifuge dissociated tumör celler på 300 g x 5 min och återanvänds i 2 ml mammosphere media. Räkna livskraftiga celler med trypan blue exclusion (Återanvända smälta celler i 5 ml tvättbuffert och räkna både livskraftiga och icke-livskraftiga celler med trypan blue exclusion. Blanda kort 50 μl celler och 50 μl trypanblått och räkna trypanblå exklusive celler med hjälp av en hemocytometer). Bered 10 ml mammosfärmedier som innehåller 8 μ…
Representative Results
Bild 1: Spårning av transduktionseffektivitet i dissocierade PDX-celler. A) PDX-dissocierade celler berikade för mänskliga epitelceller (Lin + utarmning) 24 timmar efter transduktion med pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentivirala partiklar. B) PDX-dissocierade celler från ett separat experiment, utan epitelcellberikning, 72 timmar efter transduktion med pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W. B…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Diesen Artikel zitieren
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).