Transduktion zur Kennzeichnung von PDX-Tumorzellen: Einführung des Lentivirus, der fluoreszierende Marker in die Tumorzelle in vitro ausdrückt

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Hanna, C., et al. Kennzeichnung von von Brustkrebspatienten abgeleiteten Xenografts mit traceable Reportern für Tumorwachstums- und Metastasierungsstudien. J. Vis. Exp. (2016).

Das folgende Video beschreibt eine Technik der Transduktion zur Kennzeichnung (patientenabgeleiteter Xenografts) PDX-Tumorzellen, die zur Einführung von Lentivirus verwendet wird, das grünfluoreszierendes Protein und Luziferase-Reporter in die Tumorzelle in vitro ausdrückt.

Protocol

1. Transduktion von PDX-abgeleiteten Tumorzellen Zentrifuge dissoziierte Tumorzellen bei 300 g x 5 min und resuspendieren in 2 ml Mammosphärenmedien. Zählen Sie lebensfähige Zellen mit Trypan-Blau-Ausschluss (Resuspend verdaut Zellen in 5 ml Waschpuffer und zählen Sie sowohl lebensfähige als auch nicht lebensfähige Zellen mit Trypan-Blau-Ausschluss. Mischen Sie kurz 50 l Zellen und 50 l Trypanblau und zählen Sie Trypan-Blau ohne Zellen mit einem Hämozytometer). Bereiten Sie 10 ml Mammosphären…

Representative Results

Abbildung 1: Nachverfolgen der Transduktionseffizienz in dissoziierten PDX-Zellen. A) PDX-dissoziierte Zellen, angereichert mit menschlichen Epithelzellen (Lin+ Erschöpfung) 24 Stunden nach Transduktion mit pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentiviralen Partikeln. B) PDX-dissoziierte Zellen aus einem separaten Experiment, ohne Epithelzellanreicherung, 72 hr nach Transduktion mit pHAGE-EF1aL-luc…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Materials

DMEM/F12 (1:1) Hyclone SH30023.01
bFGF BD Biosciences 354060
EGF BD Biosciences 354001
Heparin Sigma H4784
B27 Gibco/Thermo Fisher 17504-44
Anti-fungi-antibiotics Hyclone SV30010
HBSS Red Ca2+/Mg2+ free Hyclone SH30031.02
Hepes
Cultrex Cultrex 3433-005-01 Basement Matrix Extract (BME)
30 °C shaker NewBrunswick Scientific CO. INC Series 25 Incubator Shaker

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Diesen Artikel zitieren
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).

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