Følgende video beskriver en teknik til transduktion til etiket (patient-afledte xenografts) PDX tumorceller, som bruges til at indføre lentivirus udtrykke grøn-fluorescerende protein og luciferase reportere i tumor celle in vitro.
Protocol
1. Transduktion af PDX-afledte tumorceller Centrifuge dissociated tumorceller på 300 g x 5 min og genbruges i 2 ml mammosphere medier. Tælle levedygtige celler ved hjælp af trypan blå udelukkelse (Resuspend fordøjet celler i 5 ml vask buffer og tælle både levedygtige og ikke-levedygtige celler ved hjælp af trypan blå udelukkelse. Kort, bland 50 μl af celler og 50 μl trypan blå og tælle trypan-blå eksklusive celler ved hjælp af en hæmocytometer). Der fremstilles 10 ml mammosfæremedier …
Representative Results
Figur 1: Sporing af transduktionseffektivitet i dissociated PDX-celler. A) PDX-dissociated celler beriget til humane epitelceller (Lin + depletion) 24 timer efter transduktion med pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentivirale partikler. B) PDX-dissocierede celler fra et separat forsøg uden epitelcelleberigelse, 72 timer efter transduktion med pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W. Begge paneler vise…
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).