Embriyo Bazlı Kimyasal Toksisite Ekranı: Zebra Balığı Embriyolarının Geliştirilmesi Üzerindeki Etkilerinin Değerlendirilmesi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Hao J. vd., Büyük Ölçekli Zebra Balığı Tabanlı In vivo Küçük Molekül Ekranı. J. Vis. Exp. (2010)
Bu makalede zebra balığı embriyoları kimyasal toksisite taraması için kullanılmaktadır. Kimyasal toksisite fenotip okumaları ile ilişkilidir. Örnek protokol, kimyasal toksisite taramasını gerçekleştirmenin metodolojik bir yaklaşımını göstermektedir.
Protocol
1. Küçük Molekül Kütüphanesinin Devri Bileşik transfer robotik transfer yöntemleri ile otomatik hale getirilmesine neden olurken, manuel transfer yöntemini açıklayacağız. Küçük molekül kitaplıkları genellikle 96 kuyulu bir biçimde sağlanır ve her bileşik DMSO’da 10 mM stok olarak depolanır. Bileşikler eklendiğinde embriyoların aşamaya ulaşmasından yaklaşık 60 dakika önce, küçük moleküllerin aliquotlarını (kaynak plaka) içeren i…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
|||
| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
Diesen Artikel zitieren
Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).