Schermo di tossicità chimica a base embrionale: valutazione degli effetti sullo sviluppo di embrioni di zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hao J. et al., Schermo a piccole molecole in vivo a base di zebrafish su larga scala. J. Vis. Exp. (2010)
In questo articolo, gli embrioni di zebrafish vengono utilizzati per lo screening della tossicità chimica. La tossicità chimica è correlata con le letture del fenotipo. Il protocollo campione mostra un approccio metodologico nell’esecuzione dello screening della tossicità chimica.
Protocol
1. Trasferimento della libreria di piccole molecole Mentre il trasferimento composto può essere automatizzato con metodi di trasferimento robotico, descriveremo il metodo di trasferimento manuale. Le librerie di piccole molecole sono tipicamente fornite in un formato a 96 pozzi, con ogni composto immagazzinato in DMSO come stock da 10 mM. Circa 60 minuti prima che gli embrioni raggiungano lo stadio in cui devono essere aggiunti i composti, scongelare un numero desid…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).