FITC-Dextran Feeding: een methode om intestinale permeabiliteit te kwantificeren bij C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Le, T. A. N., et al. Het meten van de effecten van bacteriën en chemicaliën op de darmpermeabiliteit van Caenorhabditis elegans. J.Vis. Exp. (2019).
Deze video introduceert een methode om de integriteit van het C. elegans darmlumen te visualiseren en te meten door wormen fitc-gelabelde dextran te voeren. Het voorbeeldprotocol toont de test die is uitgevoerd met 3,3′-diindolylmethane (DIM)-behandelde en door ziekteverwekkers gevoede wormen.
Protocol
Dit protocol is een uittreksel uit Le et al, Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Voorbereiding van NGM-platen voor het testen van de effecten van een chemische stof (DIM) o…
Representative Results
Figuur 1: Het effect van DIM op de darmpermeabiliteit van C. elegans gevoed P. aeruginosa. Microscopiebeelden van wormen van (A) E. coli OP50 zonder FITC-dextran voeding, (B) E. coli met FITC-dextran voeding, (C) P. aeruginosa PAO1 met FITC…
Materials
| 3,3’-diindolylmethane | Sigma | D9568 | |
| 90×15 mm Petri dishes | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Bactor Agar | Beckton Dickinson | REF. 214010 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | F1635 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma | C3045 | |
| Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene | Corning Incorporated | REF. 3631 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Fluorescein isothiocyanate – dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount aqueous mounting medium | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS High-Content Analysis System | PerkinElmer | HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | Korean Collection for Type Culture | KCTC NO. 1637 | |
| Sodium Chloride | Fisher Bioreagents | BP358-1 | |
| Stereo Microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
Diesen Artikel zitieren
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).