Procesamiento de patas de insectos para microscopía de fluorescencia: un método para preservar estructuras neuromusculares para imágenes

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).

Este video describe un método para diseccionar, arreglar y montar la pierna adulta De Drosophila mientras preserva su neuromusculatura intacta para el análisis de imágenes.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Disección y fijación de las piernas Tome una placa de vidrio multi-pozo y llene el número apropiado de pozos con 70% de etanol. Añadir 15-20 CO2moscas anestesiadas (de cualquier sexo y cualquier edad) a cada pozo y mediante el uso de un cepillo, suavemente dab las moscas en la solución de etanol hasta q…

Representative Results

Figura 1: Procedimiento para montar las piernas en diapositivas del microscopio. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

View Video