Аналитической ультрацентрифуге (AUC) образца ячейка содержит образцов и эталонов буфера и в ходе экспериментов и подвергается воздействию высокого вакуума и ротора со скоростью до 60000 оборотов в минуту. Это видео будет демонстрировать строгим вниманием к деталям необходимые для сборки, погрузки и выравнивание этого очень важная составляющая эксперимента AUC.
Аналитической ультрацентрифуге (AUC) является мощным инструментом, который биофизических позволяет записывать профили макромолекулярных осаждения центрифугированием при высокой скорости. При правильно спланирована и проведена, скорости осаждения или AUC эксперимент седиментации равновесия может выявить много о белка в отношении размера и формы, образец чистоты, коэффициент седиментации, олигомеризации государств и белок-белковых взаимодействий.
Этот метод, однако, требует строгого уровень технической внимания. Пример клетки провести секторный кусок центре между двумя сборками окна. Они запечатаны с крутящим моментом давлении около 120-140 в / кг. Буфера ведения и образец загружаются в центральную секторов, а затем после герметизации, клетки точно выстраиваются в титановой ротор так, чтобы оптические системы обнаружения сканирования и образцов и эталонов буфера в той же радиальной средней линии пути через каждый центральный сектор вращаясь со скоростью до 60 000 оборотов в минуту и при очень высоком вакууме
Мало того, что правильный монтаж ячейки образец критического, компоненты кюветы очень дороги и должны быть должным образом заботились, чтобы убедиться, что они находятся в оптимальном рабочем состоянии, чтобы избежать утечки и поломки в процессе экспериментов. Ручка окна тщательно, потому что даже малейшая трещина или царапина может привести к поломке в центрифуге. Контакта между центральным и окна должны быть как можно плотнее, т.е. кольца Ньютона не должны быть видны после крутящий момент давление. Пыль, волокна, царапины и масла с обеих окнах или центральным всех компромиссом этого контакта и может очень легко привести к утечке решений из одного сектора в другой или утечки из центральной все вместе. Мало того, что драгоценные образцы потеряли, утечки решений во время эксперимента вызовет дисбаланс давления в клетке, что часто приводит к разбитые окна и центральные части. Кроме того, плагин прокладки и жилищно зажигания должны быть надежно в месте, чтобы избежать решения время вытащил из центрального сектора через загрузку дырок высокого вакуума в камере центрифуги. Окно лайнеров и прокладки должны быть свободны от разрывов и трещин, которые могут вызвать движение в результате чего разбитые окна.
Это видео будет демонстрировать наши процедуры образца сборки ячейки, крутящий момент, погрузки и ротора выравнивание чтобы свести к минимуму повреждения компонентов, решение утечки и поломки во время идеальный эксперимент AUC.
Надлежащей сборке клетки, проба вставки и выравнивание ячеек в роторе имеет решающее значение для высокого качества экспериментов AUC. Это относится, в частности, для экспериментов, которые требуют очень детального анализа полученных данных по профилям макромолекулярных осаждения, например, при изучении белковых взаимодействий и определения следовых количествах совокупности. Зачастую качество экспериментальной установки является предельным для точности и точности результатов исследования AUC. Более подробную информацию о практической разработки и дальнейшего выполнения экспериментов AUC, см. ссылки 1 – 3. Семинары по практической установки, теории и анализа данных экспериментов AUC проводятся два раза в год в нашей лаборатории при Национальном институте здоровья [4].
Мы признаем, поддержки исследований по Внутренние программы исследований NIBIB, NIH.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4-place Ti analytical rotor | Beckman Coulter | 361964 | ||
Torque stand assembly | Beckman Coulter | 361318 | ||
Cell alignment tool | Beckman Coulter | 362340 | ||
Spinkote Lubricant | Beckman Coulter | 306812 | ||
Counterbalance | Beckman Coulter | 360219 | ||
Cell Housing kit | Beckman Coulter | 334602 | ||
Window gasket | Beckman Coulter | 327021 | ||
Window liner | Beckman Coulter | 362329 | ||
Window, sapphire | Beckman Coulter | 307177 | ||
Window, quartz | Beckman Coulter | 301730 | ||
Window holder | Beckman Coulter | 305037 | ||
12mm double sector Epon centerpiece | Beckman Coulter | 306493 | ||
Cell plug gaskets | Beckman Coulter | 327022 | ||
Cell housing plug | Beckman Coulter | 362327 |