マウス腹腔細胞の分離

プロセスを開始する前に、以下の項目は、収集と準備に注意する必要があります。 アイス 27グラムの針で5ミリリットル注射器 25グラムの針で5ミリリットル注射器発泡スチロールブロックとマウスを取り付けるためのピン取り付けブロックを置くことができる上トレイはさみや鉗子コレクションチューブ 70％エタノール PBSで3％ウシ胎児血清（FCS）（前は氷上で冷却して保持） マウスを安楽死させる、70％エタノールでそれをスプレーし、その背面に発泡スチロールのブロックにマウントします。 ハサミとピンセットを使用すると、腹膜の外側の皮膚をカットし、静かに腹腔の内側を覆う内側の肌を露出するために、それを引き戻す。 27グラム針を用いて腹腔内に、氷冷PBS（3％FCSを含む）5 mlを注入する。ない穿刺あらゆる臓器にまで注意して腹膜にゆっくりと針を押し込みます。 注入後、軽くPBS溶液に接続されているすべての細胞を取り除くために、腹膜をマッサージ。 腹膜の5 mlシリンジに接続されて、25gの針、ベベルを挿入し、脂肪組織や他の臓器で目詰まりを避けるために、静かに針の先端を移動させながら液体を集める。できる限り多くの流体を収集し、シリンジから針を除去した後、氷上に置きチューブに回収細胞懸濁液を入金。 オプション：ステップ4-6を繰り返します。 腹膜の内側の皮膚の切開を行うと鉗子で皮膚を押しながらすると空洞から残りの液を収集するためにプラスチック製パスツールピペットを使用してください。 ステップで6または7目に見える血液汚染が検出された場合、汚染されたサンプルは破棄されるべきである。 、8分間1500rpmで採取した細胞懸濁液をスピン上清を破棄し、カウントするために必要なメディアまたはPBSで細胞を懸濁します。 チオグリコール酸を得るために代替プロトコルは、マクロファージを誘発した。 このメソッドは、マクロファージのより高い収量を得るために使用されます。 3％（w / v）の各マウスの腹腔内にブリューチオグリコール酸培地（7）5 mlを注入する。 3-5日を待って、セルのコレクションのために上記のステップ1へ進みます。 nonelicitedアプローチに比べ、約10倍以上のマクロファージを採取することができます。唯一の懸念は、この手順で得られたマクロファージはそれらの生理学的特性のいくつかで異なることです。 代表的な結果： unmanipulatedマウスから、5〜10000000腹腔細胞は、良好なアイソレーションプロトコルで取得できます。すべての生細胞の中で、50〜60％がB細胞である、〜30％のマクロファージと5〜10％は、T細胞（図1）です。 図1。腹膜腔から単離した細胞の表現型。それらは抗マウスTCRβ- FITC、B220 – PE -テキサスレッド、CD11bパシフィックブルー、CD23 – PE – Cy7とCD5 – APCで染色した腹腔細胞の以下の単離。代表的なフローサイトメトリープロットは、BおよびT細胞（）、マクロファージ（B）、B1とB2セル（C）とB1AとB1B細胞（D）の割合を示しています。