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変異型メチオニンtRNA合成酵素マウス株を用いた複合体組織からの細胞型特異的タンパク質精製・同定
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Cell-Type Specific Protein Purification and Identification from Complex Tissues Using a Mutant Methionine tRNA Synthetase Mouse Line
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変異型メチオニンtRNA合成酵素マウス株を用いた複合体組織からの細胞型特異的タンパク質精製・同定

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07:39 min

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April 13, 2022

DOI:

10.3791/63713-v

DOI:
10.3791/63713-v

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07:39 min
April 13, 2022

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21 Views
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1Max-Planck-Institute for Brain Research,Synaptic Plasticity Department, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology,Veterinary School, Complutense University of Madrid

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このプロトコルでは、変異型L274G-メチオニンtRNA合成酵素(MetRS*)を発現するマウス株を使用して、アジドノールロイシン(ANL)による細胞種特異的タンパク質標識を実行する方法と、標識された細胞種特異的タンパク質の単離に必要な手順について説明します。生きたマウスにおける2つの可能なANL投与経路を、(1)飲料水と(2)腹腔内注射によって概説します。

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Cell-type SpecificProtein PurificationProtein IdentificationMutant Methionine TRNA SynthetaseCell Type Specific ProteinsIn VitroIn VivoImmunofluorescentAlkylationIodoacetamideBuffer ExchangeClick ChemistryAzidonorleucine IncorporationNeutravidin Binding

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Nassim-Assir, B., Ouro Corredera, D., Alvarez-Pardo, R., tom Dieck, S., Ciirdaeva, E., Schuman, E. M., Alvarez-Castelao, B. Cell-Type Specific Protein Purification and Identification from Complex Tissues Using a Mutant Methionine tRNA Synthetase Mouse Line. J. Vis. Exp. (182), e63713, doi:10.3791/63713 (2022).

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